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文献和实验-DNA液,加入6ml DMEM完全培养基,37℃孵育过夜,再换液。 7 培养过程中观察细胞生长情况。约2周后可观察到细胞病变(CPE)出现(如用pAdTrack-CMV质粒,由于含GFP,可观察到绿色荧光)。 四 重组病毒鉴定 1 转导10-14d后,收集细胞沉淀,加入2ml灭菌的PBS混悬,冻融细胞,离心后收集上清保存于-80℃。 2 取30-50% 步骤1中上清,感染50-70%饱和度的25cm2 方瓶中293细胞。2-3d后出现明显细胞
,polystyrene (PS)为透明材质,可依实验需要而选择适合材质之离心管。1.5. glass pastuer pipet:9 inch,用以抽掉废弃培养液等。1.6. 玻璃血清瓶(Pyrex or Duran glassware):100 ml,250 ml,500 ml,1000 ml。2. 清洗2.1. 新购玻璃血清瓶先以0.1~0.05N HCl浸泡数小时,洗净后才开始使用。2.2. 用过之玻璃血清瓶,以高压蒸汽灭菌,洗净后分别用一次与二次去离子水冲洗干净,勿加清洁剂清洗。3. 灭菌3.1. 实验
培养方法 一、器具:1、培养皿(35mm)(或50cm2培养瓶)2、6孔(35mm)培养板、24孔培养板3、滴管4、小青瓶5、100ml、250ml玻璃瓶6、翻口橡皮塞7、烧杯:1000ml、500ml、100ml、50ml8、容量瓶:1000ml、500ml、100ml9、量筒:50ml、100ml、250ml10、玻璃棒11、pH试纸12、滤器(0.22μl,γ射线菌一次性使用)13、注射器:10ml、20ml14、24mm×24mm盖玻片 二、器具处理: 玻璃器皿、塑料器皿,予清洗、泡酸、三蒸水
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