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文献和实验1.塑料离心管:62.刻度离心管:13. 滴管:长: 1 吸酚:氯仿混合液中: 1 吸乙醇短(钝口) : 1吸DNA水溶液4.细玻棒:15.移液管:16.微量取样器17.手套:1副8.离心机9.紫外分光光度计10.37℃水浴,50℃水浴11.组织捣碎器12.电泳仪及电泳槽试剂1.裂解缓冲液:50mmol/l Tris—Hcl pH7.420mmol/lEDTA、0.5%SDS100mmol/l NaCl配法: 1mol/l Tris—HCl pH7.4 50ml 20%SDS 25ml 2mol
。 8. 通过考马斯亮蓝染色观察蛋白质泳带。 9. 从胶上切下目标带,将其放到微量离心管中,用 1 ml 50% 乙腈洗两次,每次 3 min。 10. 用胰蛋白酶消化胶中的蛋白质,再将肽电洗脱。 11. 通过窄孔高效液相色谱分离肽。将收集的肽在 ABI 477A 或 494A 机器上进行自动 Edman 降解测序。
一次。 吸出混合物的液体部分。加入 800 μl 的 1 × SDS 胶加样缓冲液到球珠中,煮沸 4 min。 将样品加入到大孔的不连续 SDS-PAGE 梯度胶中,在 10 mA 的恒定电流下电泳过夜。 通过考马斯蓝染色观察蛋白质泳带。 从胶上切下目标带,将其放到微量离心管中,用 1 ml 50% 乙腈洗两次,每次 3 min。 用胰蛋白酶消化胶中的蛋白质,再将肽电洗脱。 通过窄孔高效液相色谱分离肽。将收集的肽在 ABI 477A 或 494A 机器上进行自动 Edman
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