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文献和实验。 4.建议使用RNA 专用分析仪器设备,如电泳槽、微量加样器等。 六、实验准备 从所有样品中提取总RNA 和基因组DNA 都需做如下准备: 1.RNase-free 的Tip 头、1.5 ml 离心管、带4~6 号针头的1 ml 注射器。 2.4℃预冷Buffer R-A、Buffer R-B、Buffer R-C 和Buffer R-D。 3.65℃预热Buffer G-A、Eluent 或去离子水。 4.检查Buffer R-E 是否出现沉淀,若有沉淀请于37℃温育至沉淀完全溶解
。 8. 通过考马斯亮蓝染色观察蛋白质泳带。 9. 从胶上切下目标带,将其放到微量离心管中,用 1 ml 50% 乙腈洗两次,每次 3 min。 10. 用胰蛋白酶消化胶中的蛋白质,再将肽电洗脱。 11. 通过窄孔高效液相色谱分离肽。将收集的肽在 ABI 477A 或 494A 机器上进行自动 Edman 降解测序。
1.塑料离心管:62.刻度离心管:13. 滴管:长: 1 吸酚:氯仿混合液中: 1 吸乙醇短(钝口) : 1吸DNA水溶液4.细玻棒:15.移液管:16.微量取样器17.手套:1副8.离心机9.紫外分光光度计10.37℃水浴,50℃水浴11.组织捣碎器12.电泳仪及电泳槽试剂1.裂解缓冲液:50mmol/l Tris—Hcl pH7.420mmol/lEDTA、0.5%SDS100mmol/l NaCl配法: 1mol/l Tris—HCl pH7.4 50ml 20%SDS 25ml 2mol
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