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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
大量
- 英文名:
Hotstart CH DNA Polymerase
- 保质期:
切勿冻存,有效期24个月
- 供应商:
上海泽叶生物科技有限公司
- 保存条件:
长时间储存于4℃
- 规格:
250 units
产品说明:
本制品是一款采用化学基团修饰的重组Taq DNA 聚合酶,适用于Hot Start PCR。常温下,Taq DNA聚合酶的活性被化学基团封闭,从而抑制了模板引物的非特异退火或引物二聚体引起的非特异扩增。当扩增反应体系被加热到95℃热激10 min时,化学基团从聚合酶上脱落,聚合酶活性得到完全恢复。
■ 产品组成:
| 产品名称 | 包装规格 | |
| ZY2091 | ZY2094 | |
| Hotstart CH DNA Polymerase(5 U/μl) | 50 μl | 4×50 μl |
| 5× PCR Buffer | 1 ml | 4×1 ml |
| Tris-HCl(pH8.0) | 20 mM |
| KCl | 100 mM |
| EDTA | 0.1 mM |
| DTT | 1 |
| Tween 20 | 0.5% |
| Nonidet P-40 | 0.5% |
| Glycerol | 50% |
-20℃长期保存,保质期2年
■ 用途:
常规PCR、热启动PCR、qPCR、基因组PCR、TA克隆、引物延伸、DNA标记
■ 活性定义:
用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物,在74 ℃,30分钟内,摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1个活性单位(U)。
■ PCR产物末端形状:
使用本制品扩增得到的大部分PCR产物3‘端附有一个“A”碱基,因此可直接克隆于T-vector。
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文献和实验非特异性扩增的概率降到最低,想出了这种只有在高温下经过一定的时间才能激活并释放活性的酶—热启动酶。 热启动酶多用两种修饰方式:化学修饰和抗体修饰。 例如: Vazyme 的 ChamQTM QPCR Master Mix 中的 Champagne TaqTM DNA Polymerase 是经过抗体修饰的 Taq DNA Polymerase,95 ℃ 加热 30 sec 就可以灭活抗体激发酶活。AceQ® QPCR Master Mix 中 AceTaq®DNA Polymerase 是经过化学修饰
进行,且要将 PCR 仪预热,这种方法就类似于热启动,能够一定程度的抑制错配。但是酶在低温下也存在活性,只要体系中有 DNA 链存在,就会扩增产生非特异性条带。采用热启动的方法就是在达到变性温度之前完全抑制酶的活性,而最有效的方法就是使用热启动 Taq 酶(或热启动高保真聚合酶)去扩增,它的原理就是采用化学修饰的方法封闭酶的活性中心,当温度上升到 95℃时恢复活性,指导扩增。 4. 巢式 PCR 采用巢式 PCR 进行扩增,在多轮扩增结果中提高扩增特异性和灵敏度。与普通 PCR 不同的是,它采用两对引物进行扩增
STD (5)无扩增或 CT 值很大 检查一下你所用的酶是否为化学修饰的热启动酶,预变性时间至少 5 min,如果是高 GC 的模板,可以延长预变性时间至 10 min,预变性时间不够,会导致酶活未完全释放,酶活释放不好,那扩增效率肯定就不行啦,所以大家在用 qPCR 试剂的时候,一定要注意分辨热启动酶的封闭手段哦~ (6)反应结束无扩增曲线出现 这个问题的常见原因,主要可以归结为以下 5 种: 反应循环数不够:一般建议设置循环数为 40。 程序中未设置信号采集步骤:注意
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