Histamine Test 组氨检测试剂盒

组胺测定试剂盒

显色法测定组胺

 

　　对于以生鱼（鲜鱼、冷冻鱼肉）为原料的食品来说，为了防止组胺过量而导致过敏性中毒，对于食品组胺浓度测定的管理是很重要的。

　　但是，以前的组胺检测需要耗时一天，检测费用高，需要使用大型检测设备。如果用显色法组胺检测系统，生鱼（鲜鱼、冷冻鱼肉）的组胺含量检测可以快捷地完成。

获奖履历：

　　2007年平成19年度日本水产学会水产技术奖

　　2014年平成26年度日本酱油协会日本酱油技术奖

 

◆特点

　　●　简单  由于酶的特异性高，无需使用强酸或有机溶剂，任何对象均可简单、安全地分析

　　●　迅速  如果是生鱼，检测和提取过程仅需要1个小时即可得到结果。

　　●　高性价比  用高性价比的试剂和检测器就可检测，免除了仪器成本。

 

◆测定原理

 

◆性能

●　特异性：即使样本中含有尸胺和腐胺等其他的胺类也不影响检测结果。

●　测定范围：0.4-6 ppm生鱼样本换算10-150 ppm（稀释25倍）。

●　测定时间：各试剂注入后约20分钟。

 

◆试剂盒组成

试剂名	主要成分	包装
酶	组胺脱氢酶	冷冻干燥品  6瓶
显色试剂	WST-8/1-Methoxy PMS	冷冻干燥品  6瓶
缓冲液	Tris缓冲液	24mL       3瓶
标准液（30 mL）	组胺	30mL       1瓶

（60次测定：10次*6）（2-8℃保存）

注意：

●　测定时推荐分光光度计（在470 nm处左右检测）

●　此试剂除了自主卫生检查和研究用途以外不可使用。

 

◆测定方法

●　下文所示显色法测定组胺实验手册

●　生鱼（分光光度计测定）

 

◆显色法测定组胺实验手册

实验器具准备

●　分光光度计

●　微量吸管

●　移液器（分注0.5 mL溶液）

●　测量吸管

●　秒表

●　塑料试管两钟（容量约50 mL、10 mL）

●　试管架

●　水浴锅（设置到37℃）

●　遮光用的锡箔纸和箱子

●　天平（可测定1g类型）

●　粉碎机（研钵、匀浆器等）

●　漏斗

●　滤纸

●　旋涡混合器

●　冰浴装置

●　药匙

注意：因为组胺易吸附在玻璃上，试管等请使用塑料材质。

 

实验试剂准备

1、蒸馏水或者去离子水

2、0.1M EDTA·钠水溶液（pH=8）：提取用溶液（将市售的0.5M EDTA溶液（pH=8）制备成5倍稀释液，可作为提取用溶液使用。）称取EDTA二钠二水合物37.2 g，倒入1 L容器。加入约750 mL蒸馏水。搅拌混匀。用氢氧.化钾水溶液或者氢氧.化钠水溶液调节pH值到8.0。pH值是在搅拌停止时的状态测定。将配置好的溶液倒入1 L量筒，用蒸馏水定容到1 L。制备完毕后倒入新容器，在室温下保存。

 

操作流程

1.检测液的配制

① 称取样本（生鱼）约10 g置于粉碎机制成样本粉末。

② 称量1 g样本装入塑料试管（50 mL容量）。

③ 向试管中加入24 mL提取用溶液，用漩涡混合器使其拌匀。

④ 将试管置于沸水中20分钟，加入提取。

⑤ 将试管置于冰上冷却后，清理样本碎块，用漩涡混合器使其拌匀。

⑥ 用滤纸（No.5C）过滤步骤⑤的提取液。

⑦ 抽取滤液1 mL以上作为检测液。

 

2.试剂的准备

① 显色试剂（紫色标签）用11 mL蒸馏水溶解。

② 酶试剂（绿色标签）用6 mL缓冲液（粉红色标签）溶解。

 

3.测定

① 准备4个塑料试管，如下表所示加入各个试剂。

（1次测定情况）同一样本3次测定的情况：（样本，空白样本，标准液，显色对照）*3=12

② 遮光处理，37℃孵育15分钟，然后用分光光度计测定各反应液的吸光度。

	检测液Es	检测液空白Eb	标准液Estd	显色对照Ec
检测液（mL）	0.5	0.5	—	—
水（mL）	—	—	—	0.5
标准液（mL）	—	—	0.5	—
显色试剂（mL）	0.5	0.5	0.5	0.5
缓冲液（mL）	—	0.5	—	—
酶溶液（mL）	0.5	—	0.5	—

　　Es：检测液的吸光度  Eb：检测液空白的吸光度 Estd：标准液的吸光度 Ec：发光对照的吸光度

 

组胺浓度的计算方法

计算式：

样本液中的组胺含量（mg/L=ppm）=(Es-Eb)/（Estd-Ec）*4^※1*25^※2

　　样本液中的组胺含量（mg/L=ppm）=(Es-Eb)/（Estd-Ec）*100

※1  4：标准液的组胺浓度     
※2  25：样本溶液稀释25倍