大片段DNA凝胶回收试剂盒

大片段DNA凝胶回收试剂盒

产品组分

货号	ZY1074 （50次）	ZY1075 （100次）	ZY1076 （200次）
溶液BD	45ml	90 ml	90 ml×2
溶液PE	15 ml	15 ml×2	20 ml×3
溶液Eluent	2.5 ml	5 ml	10 ml
DNA纯化柱	50个	100个	200个
说明书	1份	1份	1份

 

● 溶液PE初次使用前用无水乙醇按1: 4稀释，即含80%乙醇。

● 溶液BD中含有变性剂，请不要直接接触皮肤。

● 上述产品组分均可单独购买，详见产品索引。

产品说明

本产品采用了经典的硅胶膜技术，用于从琼脂糖凝胶中回收大片段DNA（5-40 kb）。其纯化原理是含有目的片段的琼脂糖凝胶溶解后，硅胶膜柱高效可逆地吸附体系中的DNA片段（高盐、低pH值），蛋白及其它杂质不被吸附而被除去，被吸附的DNA片段在低盐、高pH值条件下再被洗脱纯化。一次可回收30 μg高纯度DNA片段，此DNA片段可直接用于各种酶促反应等。

 

质量控制

从1 % TAE琼脂糖凝胶中纯化50 bp、1,000 bp、10,000 bp的DNA片段。

 

保存条件

室温保存2年。

注意事项--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

 

● 溶液PE第一次使用前请按瓶上标签加入4倍体积的无水乙醇，即15 ml溶液PE中加入60 ml无水乙醇，20 ml溶液PE中加入80 ml无水乙醇，使用后立即盖紧盖子。

● 本产品对电泳使用的琼脂糖种类没有严格限制。为了保证回收DNA的质量和回收效率，尽量使用高纯度的琼脂糖。

● 电泳时请使用新鲜配制的TAE电泳缓冲液，以免影响电泳及回收效果。TBE电泳缓冲液中的硼酸与琼脂糖相互作用生成的复合物会影响DNA的回收效率，因此TBE凝胶电泳不适合用于DNA回收。

● 请适当延长电泳时间，在条带分离清晰后进行切胶回收，以免回收到多余杂带。

● 为提高DNA回收收率，切胶时应尽量除去多余的胶块。

● 本试剂盒纯化柱的DNA吸附能力强。但如果DNA浓度小，或DNA初始量少，回收率将会偏低。

● 溶液Eluent（10 mM Tris-HCl, pH 8.5）中不含EDTA，其收集的DNA片段可直接用于各种酶促反应等，不会影响后续试验。

● 为了保证回收效率，请不要使用未调整pH值的超纯水洗脱目的片段。

● 请严格按照操作步骤操作。

操作步骤--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

1  切取含有目的DNA片段的琼脂糖凝胶条带。

● 尽量切除不含有目的DNA部分的凝胶，减少凝胶体积，提高DNA回收率。

    ● 切胶时，请使用长波长UV（360 nm）光盒。且不要将DNA长时间暴露在紫外灯下，以防DNA损伤。

2  称取凝胶的重量，近似地确定其体积。

    ● 凝胶重量的称量方法：取1.5 ml或2 ml离心管，用电子天平称初质量，切胶装在离心管后称终质量，两者差即为胶的质量。不同离心管的重量有差异，因此，每个离心管的重量需单独称量。

3  按照每100 mg琼脂糖凝胶对应100 µl溶液BD的比例，向离心管中加入溶液BD。

4  50℃水浴7-10min，直至凝胶完全融化。期间需要振荡混合3次。

    ● 琼脂糖必须完全融化，以免堵塞柱子，严重影响DNA片段的回收效率。

    ● 如果总体积大于500 µl，可适当增加溶胶时间。

● 若此时溶液变红，可加10 µl 3M NaAc（pH 5.2）。

如要从反应液中回收DNA，则向反应液中加入等体积的BD，充分混匀，后续步骤相同：

5  将步骤4所获溶液置于DNA纯化柱中，静置2min。

● 胶块完全溶解后最好将胶溶液温度降至室温再上柱，因为纯化柱在较高温度时结合DNA的能力较弱。

● 若溶液体积大于DNA纯化柱的容积（700 µl），可分两次离心。

6  12,000 rpm离心1min，弃滤液。

● 此时DNA片段被吸附于DNA纯化柱中的硅胶膜上。

7  加入500 µl溶液BD，12,000 rpm, 离心1min，弃滤液

8  加入500 µl溶液PE，12,000 rpm, 离心1min，弃滤液。

    ● 溶液PE初次使用前用无水乙醇按1: 4稀释，即含80%乙醇。

    ● 此步骤的作用是将硅胶膜上吸附的蛋白、盐等杂质洗脱，以获得高质量的DNA片段。

9  加入500 µl溶液PE，12,000 rpm, 离心1min，弃滤液。

10  12,000 rpm离心3min，以彻底去除纯化柱中的液体。

    ● 此步骤的作用是去除残留乙醇，避免影响后续酶促反应。同时也利于DNA片段的充分溶解。

11  将离心柱置于新的1.5 ml离心管中。向纯化柱的中央处，悬空滴加30-100 µl溶液Eluent（60℃预热），静置2min。

12,000 rpm 离心1min，管底即为目的DNA片段。贮存于-20℃。

   ● 溶液Eluent可用无菌双蒸水代替，但其pH需为8.0-8.5，加入体积视DNA目的片段的多少、用户对目的片段浓度要求而定。

   ● 对溶液Eluent 65℃预热，会提高提取DNA目的片段的产量。