通用菌落PCR检测试剂盒

通用菌落PCR检测试剂盒

产品简介

本试剂盒利用PCR原理，结合本公司的快速DNA聚合酶（延伸速率20s/kb），设计适用性广的最佳引物，优化PCR反应缓冲体系，同时简化检测方法，可用于各种常用T载体克隆的筛选检测。

 

产品组成

Component	ZY8011	ZY8012
2× FSTM Mix	500 μl	1 ml × 5
T-primer (10 μM)	50 μl	500 μl
超纯水	1 ml	1 ml × 10
说明书	1份	1份

 

活性定义

一个活性单位（U）指用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，在72℃、30 min内，摄入10 nmol全核苷酸所需的酶量。

 

保存条件

-20℃保存。

 

质量控制

纯度检测：经质量检测，产品不含脱氧核糖核酸内切酶、脱氧核糖核酸外切酶和核糖核酸酶污染。

功能检测：PCR方法检测本试剂盒无宿主残余DNA，也无其他DNA污染，能有效完成PCR扩增。

 

应用举例

1. 准备样品

将过夜培养的平板上的菌落编号后，用灭菌的牙签挑取单克隆菌体的一部分至反应体系中；或在1.5 ml EP管中分装500 μl含有相应抗生素的LB培养基，并做好标记，用无菌牙签提取单个菌落至上述培养基中，37振荡（250-300rpm）培养4h，取1-2 μl菌液用于扩增。

2. 配制反应体系

请于冰上配置反应体系，体系大小与组分用量与添加顺序可调整：

Ordinal	Component	Volume (20 μl reaction volume)
1	2× FSTM   Mix	10   μl
2	T-primer (10 μM)*	1 μl
3	菌体或菌液	1 μl
4	超纯水	To   20 μl

*包含了上下游引物，扩增大小约为：克隆片段+250 bp。

● 加入各组分后，请用枪头反复吸吹几次，充分混匀。

● 在一次配制多管需分装时建议按（n+1）的反应液量配制，以确保分配时的耗损不会影响实验，同时选择大于总体积的离心管便于混匀。

● 如需使用其他体积的PCR反应体系，请按各组分比例缩减或增加各组分用量。

● 将混匀的各管短暂离心，置于PCR仪中。

 

3. 设定反应程序进行PCR反应

Stage	Temperature	Time	Number   of Cycles
Initial   Denaturation	94℃	3   min	1
Denaturation	94℃	30   sec	30
Annealing	55℃	30   sec
Extension	72℃	30   sec or 45 sec
Final   Extension	72℃	5   min	1

● 设定PCR程序时，请根据目的片段大小决定延伸时间，如果目的片段大小为500 bp时，延伸时间为15 sec；500 bp-1 kb，延伸时间20 sec；目的片段>1 kb时，延伸时间按20s/kb计算。

 

3. 分析结果

反应结束后取2-5 μl反应产物与loading buffer混匀后进行琼脂糖凝胶电泳，通过凝胶成像设备观察目的条带的扩增情况。

 

注意事项

请严格按照说明书提供的实验体系及实验条件进行试验。

室温下DNA聚合酶有一定的活性，为避免发生非特异性扩增，请于冰上配置反应体系，并且最后添加FS^TMMix或模板DNA。

挑取菌落时，应选择单菌落，不要挑取太多菌体，以免影响PCR结果。