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- 极东制药
- KYO-08900
- 2025年07月16日
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- 详细信息
- 询价记录
- 文献和实验
- 技术资料
| 品牌 | 产品编号 | 产品名称 | 中文名 | 包装 |
| Kyokuto | KYO-08920 | Guaiacol Detection Kit | 愈创木酚检测试剂盒 | 100 TEST |
| Kyokuto | KYO-08900 | Va-YSG Medium | 脂环酸芽孢杆菌/嗜热耐酸芽孢杆菌 培养基 | 2ml x 100 |
与Guaiacol Detection Kit（KYO-08920）配套使用，检测果汁中含有的嗜酸耐热菌（Alicyclobacillus acidoterrestris ）。该菌不会对人体造成损害，但是会影响果汁的品质。
果汁中嗜热嗜酸菌的检测方法——膜过滤法和涂布法
- 背景
- 原理
- 原料和标准品
- 酵母提取物（212759，BD）
- 葡萄糖（215530，BD）
- 可溶性淀粉（217820，BD）
- 琼脂（214530）
- 愈创木酚测试套装（Cosmo Bio Co ., Ltd）
- 仪器设备
- 水浴锅
- 培养箱
- 实验过程
- 培养基（YSG）配制
- 溶液A：在1L烧杯中称量2g酵母提取物，1g葡萄糖和2g可溶性淀粉。加入500mL去离子水溶解。加入适量1N的盐酸或硫酸，使pH调整至3.7±0.1。
- 溶液B：取一个新的1L的烧杯。称量15g琼脂并加入500mL去离子水加热溶解。
- 在121°C下蒸汽灭菌15分钟。
- 当溶液A和B的温度都降至47±0.2°C时，在无菌条件下将溶液A倒入溶液B中混合。
- 在培养皿中倒入15至20mL配置完成的培养基（YSG）并使其凝固。将浇好的培养皿放入冰箱中存放。保质期为一个月。
- 样品准备（热击）
- 在试管中准备9mL的无菌水，在无菌条件下加入1mL浓缩果汁并混匀。
- 将试管置于80°C水浴锅中热击。当样品温度到达80±0.2°C时计时10分钟。然后快速降温至室温。
- 如果样品为单倍果汁，则无需稀释。
- 样品分析方法
- 涂布法（用于不可过滤的样品）
- 向固体YSG培养基中加入1mL热击过的稀释样品（单倍果汁无需稀释，直接取1mL样品）。将样品均匀涂抹在培养基表层。
- 将平板正放于45±2°C培养箱中培养一天。
- 一天后倒置平板并继续培养4天。
- 膜过滤法（用于可过滤样品）
- 在50mL无菌水中加入热击过的稀释样品（单倍果汁无需稀释，直接取10mL样品加入）。混匀后用0.45µm滤膜过滤。
- 在无菌条件下将滤膜转移至固体YSG培养基上。
- 倒置平板，在45±2°C培养箱中培养5天。
- 涂布法（用于不可过滤的样品）
- 结果分析
- 如果样品中菌落计数小于原料标准要求，用愈创木酚测试套装进一步检测会有无产生邻甲氧.基苯酚的微生物。如果菌落计数大于原料标准要求，则直接认定为不合格样品。
- 阳性平板应通过显微镜镜检来确定脂环酸芽孢杆菌的存在。
- 每一套测试样品需要有控制平板做比对。包括空气，阳性菌对比，YSG培养基和样品所使用的无菌水。
- 愈创木酚测试套装（供应商：Cosmo Bio Co., Ltd）
- 用接种环取10 µL不含孢子的新鲜菌落，悬浮于含有“Va-YSG 试剂 (2mL)”的试管中（≥1×108cfu/mL）。
- 在45±1°C下培养3小时或过夜。
- 加入1mL邻甲氧.基苯酚测试套装试剂1。
- 加入20µL邻甲氧.基苯酚测试套装试剂2。
- 加入20µL邻甲氧.基苯酚测试套装试剂3。
- 混匀并放置5－10分钟。
- 观察溶液的颜色变化。在10分钟内读取数据。
- 阳性控制：取2mL纯净水和100µL阳性控制并混合。重复步骤iii－vii。
- 空白：取新的“Va-YSG”试剂并重复步骤ii－vii。
- 培养基（YSG）配制
- 质量控制检测
- 这项测试需要含有少量TAB阳性菌的可过滤果汁样品作为过程检查。
- 向10mL离心管中加入1mL阳性样品（浓缩）。加入9mL无菌水或缓冲剂。
- 80±2°C热击10分钟。
- 取1mL样品至50mL无菌水中混合。
- 过滤并把阳性控制储藏在冷冻（-18°C）条件下。
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文献和实验相关实验
在评估中，故结果仅作为参考和内部品管之一部份。 材料与设备： ATCC mycoplasma detection kit:可作50～100 reactions. 提供1st stage primer mixture与2nd stage primer mixture positive control DNA (A. laidlawii ; M. pirum) PCR reagents : Taq polymerase ( 5 U / ul ) dNTP( dGTP, dCTP, dTTP
： PI和Hoechst33342都是sigma公司的粉剂，不是kit，2、具体方法： 将PI和Hoechst33342的终浓度调到10μg/mg就行，用PBS，Hank's液、生理盐水或D液任何一种溶解都可以。Hoechst33342染色37℃10min就达到饱和，PI在4℃10~20min就行。3、文献出处： 《细胞实验指南》上册，p102－125，现代生物技术译从－－科学出版社， 有好几篇文献，只列出其中的一个： Ha HC, Snyder SH. Poly(ADP-ribose
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