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- 百奥莱博
- QN1084-AXV
- 北京
- 2025年07月13日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
302
- 英文名：
SDS-PAGE loading buffer,5×(with DTT)
- 保质期：
12个月
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
10ml
特别提示：包括5×蛋白上样缓冲液(含DTT)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
产品名称：5×蛋白上样缓冲液(含DTT)
英文名称：SDS-PAGE loading buffer,5×(with DTT)
产品货号：QN1084
产品规格：10ml
本产品适用于SDS-PAGE(SDS-变性聚bǐng烯酰胺凝胶电泳)时作蛋白质上样用。其主要成份为SDS，DTT，溴酚蓝，缓冲盐溶液等。SDS可与蛋白质结合使蛋白质-SDS复合物上带有大量的负电荷，这时蛋白质本身的电荷完全被SDS掩盖，消除了各种蛋白质本身电荷的差异;SDS还可以断开分子内和分子间的氢键，破坏蛋白质分子的二级和三级结构。DTT可以断开半胱氨酸残基之间的二硫键，破坏蛋白质结构，消除了蛋白结构之间的差异。最终无电荷及结构上差异的蛋白(亚单位)，电泳速度只是与其分子量大小有关。溴酚蓝用作电泳时的指示剂，可大概指示电泳结束的时间。
使用说明：
1、请按每30微升蛋白样品加入10微升上样缓冲液的比例(5倍稀释)来使用。如果蛋白样品浓度过高，可用双蒸水稀释。
2、混匀后，100℃水浴加热5-10分钟，使蛋白变性。
3、冷却至室温后，10000-14000rpm离心2-5分钟，取上清直接上样电泳即可。
注意事项：
1、聚bǐng烯酰胺凝胶浓度为8%时溴酚蓝指示条带的位置大概在30kd左右， 胶浓度为12%时，约在20kd左右，胶浓度为15%时，大概在10kd。请根据自己目标条带来判断结果电泳时间。
2、本试剂因含DTT，有一定的毒性，为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
3、蛋白上样缓冲液含有溴酚蓝指示剂，PH值受保存温度影响，在低温冻存状态下，溶液可能会呈现深棕色，不影响产品使用。
储存条件：-20℃，有效期12个月。
我公司销售的5×蛋白上样缓冲液(含DTT)现货供应，质量上佳，价格普惠，欢迎广大新老客户踊跃订购。
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文献和实验系统的负担，导致包涵体的形成。生长温度可能是影响大肠杆菌高度表达目的蛋白的最重要因素。低温培养能在一定程度上抑制包涵体的形成。IPTG 的浓度对表达水平的影响也非常大。所以通过试验确定最佳的培养条件是很必要的。6. 将所有样本室温最高速度离心 1 分钟，弃上清，沉淀重悬于 100 微升 1×SDS 蛋白上样缓冲液中，100℃ 加热 5 分钟，室温最高速度离心 1 分钟，取 15 微升样品上样于 SDS 聚丙烯酰胺凝胶，用 SDS－PAGE 观察表达产物条带，从而确定优化的培养条件。二、大量表达靶蛋白
-PAGE 电泳分析检测结果。这种方法得到的目的蛋白 N是在细胞内与蛋白 M 天然结合的，符合体内实际情况，得到的结果可信度高。这种方法常用于测定两种目标蛋白是否在体内结合；也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用搭档。 步骤 用预冷的 PBS 溶液洗涤贴壁细胞两次（对于悬浮细胞则用台式离心机以 800-1000 rpm 转速通过离心洗涤）。 加入预冷的 RIPA 液（含蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂），RIPA 液的用量：按照 0.5 mL 每 5×106 细胞计算。 注：悬浮细胞，收集
我做NF-kB的EMSA实验方法和结果，条带不好，请大家指点！
核蛋白提取： （1）5 millions个离心收集 （2）弃上清，细胞沉淀重悬于1.5ml冰预冷的PBS缓冲液，4℃下2000 rpm离心5min。 （3）弃上清，沉淀重悬于500μl冰预冷的Buffer A离心收集，再悬于0.5 ml Buffer A。 （4）冰上放置10分钟，加入NP40使终浓度为0.5%，混匀后，轻摇20秒。 （5）4℃下1330×g离心15分钟得到细胞核。 （6）重悬于50µl Buffer B，于冰上强烈振荡15分钟，4℃下16300×g离心10分钟
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