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- 2025年07月15日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
55
- 英文名：
Ornithostrongylus quadriradiatus
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海一研
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
50T
荧光定量PCR试剂盒技术：
本实用新型专利技术公开了一种实时荧光定量PCR试剂盒，包括盒体，盒体由上盒体和下盒体组成，上盒体的底面上设有限位凸起，下盒体的顶面上设有与限位凸起匹配的凹槽，且在下盒体左右侧壁的下端均软连接有侧盖，侧盖远离下盒体的一端连接有卡勾，下盒体的上端边缘处设有环形凸起，两个卡勾分别勾住环形凸起的左右两端将上盒体固定在下盒体上；凹槽的内部设有固定杆，固定杆上通过转动件转动连接有用于放置试管的试管架；下盒体的左右两侧均设置有收纳槽。本实用新型专利技术通过将盒体分为上下组合的两个部分，并将两个部分通过侧盖连接，即可保证试剂盒的便携性，同时使用试剂盒自带的试管可提高检测的效率。
产品名称：四辐射鸟圆线虫探针法荧光定量PCR试剂盒
英文名称：Ornithostrongylus quadriradiatus
编号：EY00P4333
分类：探针荧光定量PCR试剂盒
储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。
运输：低温、避光，快递免费送货上门。
主要特征：
准确性高：创新的ASL Probe修饰探针和高特异性SNP Ligase有力的保证了分型的准确率。
重复性好：该分型体系经过反复验证和优化，获得的数据重复性极好。
低成本：无需合成大量昂贵的双标探针。
无需高质量的基因组DNA：粗提物即可进行实验操作。便于快速大量制备基因组DNA。通常386个全血DNA可在30min内制备完毕。
操作简单：简单易懂、结果清晰的分型判断标准，在PCR仪充足的情况下，单人可轻松完成超过3860个SNP数据分析。
应用：
分子标记辅助育种
遗传疾病诊断
致病候选基因研究
药物筛选研究
群体遗传研究
产品特点
1. 使用化学修饰的热启动聚合酶，反应特异性高，*程度地避免了非特异扩增；
2. 反应缓冲液经充分优化，反应灵敏快速，40个循环只需20多分钟；
3. 抗干扰能力强，反应重复性高，适合对土壤、粪便、肿瘤和血液来源的复杂样本中的靶基因进行检测分析。
在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，zui后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。
特异性荧光标记：
TaqMan法
TaqMan探针的特性：
（1）5′端标记有报告基团（Reporter, R），如FAM、VIC等
（2）3′端标记有荧光淬灭基团 （Quencher, Q）
（3）探针完整，R所发射的荧光能量被Q基团吸收 ，无荧光， R与Q分开，发荧光
（4）Taq酶有 5′→3′外切核酸酶活性，可水解探针
相对定量通过内标定量：
内标（Endogenous Control）通常是β-actin、GAPDH基因等看家基因，在细胞中的表达量或在基因组中的拷贝数恒定，受环境因素影响小，内标定量结果代表了样本中所含细胞或基因组数量。
相对定量分析方法 ：
2-ΔΔCt
前提：目标序列和内参序列的扩增效率接近100％且偏差在5％以内
1、用内参基因的CT值归一目标基因的CT值：
ΔCT（test）= CT（target,test）-CT（ref,test）
ΔCT（calibrator）= CT（target,calibrator）-CT（ref, calibrator）
2、用校准样本的ΔCT值归一试验样本的ΔCT值：
ΔΔCT= ΔCT（test） - ΔCT（calibrator）
3、计算表达水平比率：
2 –ΔΔCT=表达量的比值
几种传统荧光定量PCR方法简介：
1）四辐射鸟圆线虫探针法荧光定量PCR试剂盒内参照法：
在不同的PCR反应管中加入已定量的内标和引物，内标用基因工程方法合成。上游引物用荧光标记，下游引物不标记。在模板扩增的同时，内标也被扩增。在PCR产物中，由于内标与靶模板的长度不同，二者的扩增产物可用电泳或高效液相分离开来，分别测定其荧光强度，以内标为对照定量待检测模板。
2）竞争法：
选择由突变克隆产生的含有一个新内切位点的外源竞争性模板。在同一反应管中，待测样品与竞争模板用同一对引物同时扩增（其中一个引物为荧光标记）。扩增后用内切酶消化PCR产物，竞争性模板的产物被酶解为两个片段，而待测模板不被酶切，可通过电泳或高效液相将两种产物分开，分别测定荧光强度，根据已知模板推测未知模板的起始拷贝数。
3）PCR－ELISA法：
利用生物素等标记引物，扩增产物被固相板上特异的探针所结合，再加入抗或生物素酶标抗体－辣根过氧化物酶结合物，最终酶使底物显色。常规的PCR－ELISA法只是定性实验，若加入内标，作出标准曲线，也可实现定量检测目的。
以下是公司正在促销打折产品：
大鼠磷酸化细胞外信号调节激酶pERK定量检测试剂盒 ADP.K 质量规格：>97%,BRCAS: 72696-48-1
大鼠磷酸化蛋白激酶CP-PKC定量检测试剂盒 ADP.Ba 质量规格：>98%,BRCAS: 40436-88-2
大鼠胶原酶ICollagenaseI定量检测试剂盒 Adonitol 质量规格：>97.0%(GC) ,进口CAS: 488-81-3
大鼠髓系细胞触发受体-TREM-定量检测试剂盒 ADMA 质量规格：>98%,盐酸盐形式，美国进口CAS: 220805-22-1
大鼠胶原酶IICollagenaseII定量检测试剂盒 Adipic dihydrazide 质量规格：>98%CAS: 1071-93-8
大鼠硫氧化还原蛋白Trx定量检测试剂盒 Adipic acid 质量规格：Standard for GC,≥99.5%(GC)CAS: 124-04-9
大鼠硫氧还蛋白还原酶TrxR定量检测试剂盒 Adiphenine HCl 质量规格：含量> 99%CAS: 50-42-0
大鼠蛋白磷酸酶PP定量检测试剂盒 Adiphenine HCl 质量规格：HPLC>98%,标准品CAS: 50-42-0
大鼠孤腓肽OFQ/N定量检测试剂盒 Adenosine-5-monophosphoric acid 质量规格：>98,BRCAS: 61-19-8
大鼠单核细胞趋化蛋白4MCP-4/CCL3定量检测试剂盒 Adenosine-5'-monophosphate, free acid 质量规格：>95%，BRCAS: 18422-05-4
大鼠α微球蛋白α-MG定量检测试剂盒 Adenosine-5'-diphosphate disodium salt(ADPna) 质量规格：>95.0%,BRCAS: 16178-48-6
大鼠细胞色素P4502ECYP2E定量检测试剂盒 Adenosine-2'-monophosphate 质量规格：美国进口CAS: 81012-86-4
大鼠转化生长因子β2TGFβ2定量检测试剂盒 Adenosine 质量规格：HPLC>98%,标准品CAS: 58-61-7
大鼠溴脱氧核苷尿嘧啶BrdU定量检测试剂盒 Adenosine 质量规格：BR,>99%,细胞培养级CAS: 58-61-7
大鼠内脏脂肪特异性丝氨酸蛋白酶抑制剂vaspin定量检测试剂盒 Adenosine triphosphate 质量规格：>95.0%(HPLC),BR,可用于细胞培养CAS: 56-65-5
四辐射鸟圆线虫探针法荧光定量PCR试剂盒人神经系统周边细胞 (HPNC)( 5×105 ) 小鼠海马神经胶质细胞(EGFP标记) Mouse
CM-H084人脐静脉平滑肌细胞完全培养基100mL
SERPINI1 Others Mouse 小鼠 SerpinI1 / Neuroserpin 人细胞裂解液 (阳性对照)
L6565小鼠白血病克隆细胞系 L6565 murine leukemia cell line RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS
IL25 Protein Mouse 重组小鼠 IL25 蛋白 (His 标签)
小鼠角膜上皮细胞完全培养基 100mL
内标对荧光定量PCR的影响：
1．实时荧光定量PCR无需内标实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限，实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度，并记录在电脑软件之中，通过对每个样品Ct值的计算，根据标准曲线获得定量结果。因此，实时荧光定量PCR无需内标是建立在两个基础之上的：
1）Ct值的重现性PCR循环在到达Ct值所在的循环数时，刚刚进入真正的指数扩增期（对数期），此时微小误差尚未放大，因此Ct值的重现性极好，即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值与起始模板的线性关系由于Ct值与起始模板的对数存在线性关系，可利用标准曲线对未知样品进行定量测定，因此，实时荧光定量PCR是一种采用外标准曲线定量的方法。
2．内标对实时荧光定量PCR的影响若在待测样品中加入已知起始拷贝数的内标，则PCR反应变为双重PCR，双重PCR反应中存在两种模板之间的干扰和竞争，尤其当两种模板的起始拷贝数相差比较大时，这种竞争会表现得更为显著。但由于待测样品的起始拷贝数是未知的，所以无法加入合适数量的已知模板作为内标。也正是这个原因，传统定量方法虽然加入内标，但仍然只是一种半定量的方法。
本实用新型专利技术公开了一种实时荧光定量PCR试剂盒，包括盒体，盒体由上盒体和下盒体组成，上盒体的底面上设有限位凸起，下盒体的顶面上设有与限位凸起匹配的凹槽，且在下盒体左右侧壁的下端均软连接有侧盖，侧盖远离下盒体的一端连接有卡勾，下盒体的上端边缘处设有环形凸起，两个卡勾分别勾住环形凸起的左右两端将上盒体固定在下盒体上；凹槽的内部设有固定杆，固定杆上通过转动件转动连接有用于放置试管的试管架；下盒体的左右两侧均设置有收纳槽。本实用新型专利技术通过将盒体分为上下组合的两个部分，并将两个部分通过侧盖连接，即可保证试剂盒的便携性，同时使用试剂盒自带的试管可提高检测的效率。
产品名称：四辐射鸟圆线虫探针法荧光定量PCR试剂盒
英文名称：Ornithostrongylus quadriradiatus
编号：EY00P4333
分类：探针荧光定量PCR试剂盒
储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。
运输：低温、避光，快递免费送货上门。
主要特征：
准确性高：创新的ASL Probe修饰探针和高特异性SNP Ligase有力的保证了分型的准确率。
重复性好：该分型体系经过反复验证和优化，获得的数据重复性极好。
低成本：无需合成大量昂贵的双标探针。
无需高质量的基因组DNA：粗提物即可进行实验操作。便于快速大量制备基因组DNA。通常386个全血DNA可在30min内制备完毕。
操作简单：简单易懂、结果清晰的分型判断标准，在PCR仪充足的情况下，单人可轻松完成超过3860个SNP数据分析。
应用：
分子标记辅助育种
遗传疾病诊断
致病候选基因研究
药物筛选研究
群体遗传研究
产品特点
1. 使用化学修饰的热启动聚合酶，反应特异性高，*程度地避免了非特异扩增；
2. 反应缓冲液经充分优化，反应灵敏快速，40个循环只需20多分钟；
3. 抗干扰能力强，反应重复性高，适合对土壤、粪便、肿瘤和血液来源的复杂样本中的靶基因进行检测分析。
在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，zui后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。
特异性荧光标记：
TaqMan法
TaqMan探针的特性：
（1）5′端标记有报告基团（Reporter, R），如FAM、VIC等
（2）3′端标记有荧光淬灭基团 （Quencher, Q）
（3）探针完整，R所发射的荧光能量被Q基团吸收 ，无荧光， R与Q分开，发荧光
（4）Taq酶有 5′→3′外切核酸酶活性，可水解探针
相对定量通过内标定量：
内标（Endogenous Control）通常是β-actin、GAPDH基因等看家基因，在细胞中的表达量或在基因组中的拷贝数恒定，受环境因素影响小，内标定量结果代表了样本中所含细胞或基因组数量。
相对定量分析方法 ：
2-ΔΔCt
前提：目标序列和内参序列的扩增效率接近100％且偏差在5％以内
1、用内参基因的CT值归一目标基因的CT值：
ΔCT（test）= CT（target,test）-CT（ref,test）
ΔCT（calibrator）= CT（target,calibrator）-CT（ref, calibrator）
2、用校准样本的ΔCT值归一试验样本的ΔCT值：
ΔΔCT= ΔCT（test） - ΔCT（calibrator）
3、计算表达水平比率：
2 –ΔΔCT=表达量的比值
几种传统荧光定量PCR方法简介：
1）四辐射鸟圆线虫探针法荧光定量PCR试剂盒内参照法：
在不同的PCR反应管中加入已定量的内标和引物，内标用基因工程方法合成。上游引物用荧光标记，下游引物不标记。在模板扩增的同时，内标也被扩增。在PCR产物中，由于内标与靶模板的长度不同，二者的扩增产物可用电泳或高效液相分离开来，分别测定其荧光强度，以内标为对照定量待检测模板。
2）竞争法：
选择由突变克隆产生的含有一个新内切位点的外源竞争性模板。在同一反应管中，待测样品与竞争模板用同一对引物同时扩增（其中一个引物为荧光标记）。扩增后用内切酶消化PCR产物，竞争性模板的产物被酶解为两个片段，而待测模板不被酶切，可通过电泳或高效液相将两种产物分开，分别测定荧光强度，根据已知模板推测未知模板的起始拷贝数。
3）PCR－ELISA法：
利用生物素等标记引物，扩增产物被固相板上特异的探针所结合，再加入抗或生物素酶标抗体－辣根过氧化物酶结合物，最终酶使底物显色。常规的PCR－ELISA法只是定性实验，若加入内标，作出标准曲线，也可实现定量检测目的。
以下是公司正在促销打折产品：
大鼠磷酸化细胞外信号调节激酶pERK定量检测试剂盒 ADP.K 质量规格：>97%,BRCAS: 72696-48-1
大鼠磷酸化蛋白激酶CP-PKC定量检测试剂盒 ADP.Ba 质量规格：>98%,BRCAS: 40436-88-2
大鼠胶原酶ICollagenaseI定量检测试剂盒 Adonitol 质量规格：>97.0%(GC) ,进口CAS: 488-81-3
大鼠髓系细胞触发受体-TREM-定量检测试剂盒 ADMA 质量规格：>98%,盐酸盐形式，美国进口CAS: 220805-22-1
大鼠胶原酶IICollagenaseII定量检测试剂盒 Adipic dihydrazide 质量规格：>98%CAS: 1071-93-8
大鼠硫氧化还原蛋白Trx定量检测试剂盒 Adipic acid 质量规格：Standard for GC,≥99.5%(GC)CAS: 124-04-9
大鼠硫氧还蛋白还原酶TrxR定量检测试剂盒 Adiphenine HCl 质量规格：含量> 99%CAS: 50-42-0
大鼠蛋白磷酸酶PP定量检测试剂盒 Adiphenine HCl 质量规格：HPLC>98%,标准品CAS: 50-42-0
大鼠孤腓肽OFQ/N定量检测试剂盒 Adenosine-5-monophosphoric acid 质量规格：>98,BRCAS: 61-19-8
大鼠单核细胞趋化蛋白4MCP-4/CCL3定量检测试剂盒 Adenosine-5'-monophosphate, free acid 质量规格：>95%，BRCAS: 18422-05-4
大鼠α微球蛋白α-MG定量检测试剂盒 Adenosine-5'-diphosphate disodium salt(ADPna) 质量规格：>95.0%,BRCAS: 16178-48-6
大鼠细胞色素P4502ECYP2E定量检测试剂盒 Adenosine-2'-monophosphate 质量规格：美国进口CAS: 81012-86-4
大鼠转化生长因子β2TGFβ2定量检测试剂盒 Adenosine 质量规格：HPLC>98%,标准品CAS: 58-61-7
大鼠溴脱氧核苷尿嘧啶BrdU定量检测试剂盒 Adenosine 质量规格：BR,>99%,细胞培养级CAS: 58-61-7
大鼠内脏脂肪特异性丝氨酸蛋白酶抑制剂vaspin定量检测试剂盒 Adenosine triphosphate 质量规格：>95.0%(HPLC),BR,可用于细胞培养CAS: 56-65-5
四辐射鸟圆线虫探针法荧光定量PCR试剂盒人神经系统周边细胞 (HPNC)( 5×105 ) 小鼠海马神经胶质细胞(EGFP标记) Mouse
CM-H084人脐静脉平滑肌细胞完全培养基100mL
SERPINI1 Others Mouse 小鼠 SerpinI1 / Neuroserpin 人细胞裂解液 (阳性对照)
L6565小鼠白血病克隆细胞系 L6565 murine leukemia cell line RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS
IL25 Protein Mouse 重组小鼠 IL25 蛋白 (His 标签)
小鼠角膜上皮细胞完全培养基 100mL
内标对荧光定量PCR的影响：
1．实时荧光定量PCR无需内标实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限，实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度，并记录在电脑软件之中，通过对每个样品Ct值的计算，根据标准曲线获得定量结果。因此，实时荧光定量PCR无需内标是建立在两个基础之上的：
1）Ct值的重现性PCR循环在到达Ct值所在的循环数时，刚刚进入真正的指数扩增期（对数期），此时微小误差尚未放大，因此Ct值的重现性极好，即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值与起始模板的线性关系由于Ct值与起始模板的对数存在线性关系，可利用标准曲线对未知样品进行定量测定，因此，实时荧光定量PCR是一种采用外标准曲线定量的方法。
2．内标对实时荧光定量PCR的影响若在待测样品中加入已知起始拷贝数的内标，则PCR反应变为双重PCR，双重PCR反应中存在两种模板之间的干扰和竞争，尤其当两种模板的起始拷贝数相差比较大时，这种竞争会表现得更为显著。但由于待测样品的起始拷贝数是未知的，所以无法加入合适数量的已知模板作为内标。也正是这个原因，传统定量方法虽然加入内标，但仍然只是一种半定量的方法。
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文献和实验相关实验
相关专题 实验室很多同学都要做Real time PCR实验，实验室的师兄师姐都会有很多宝贵意见，不过也有实验室前没有做过的，查找了下资料和大家分享下关于实时荧光 Taqman 探针设计、实时荧光PCR探针的选择、引物的设计及评价。 荧光探针法是用序列特异的荧光标记探针来检测产物，探针法的出现使得定量PCR技术的特异性比常规PCR技术大大提高。目前较常提及的有TaqMan探针、FRET杂交 探针(荧光共振能量传递探针)和分子
所特有的，下游引物为通用引物就可以了。 荧光定量PCR检测方法有SYBR Green染料法和TaqMan探针法。前者需要调整引物浓度以及引物扩增效率，把引物二聚体调整到越小越好；探针法则需要设计荧光探针，这其中由于MGB探针需要碱基数量少和特异性好的特点而被推荐。 探针设计位置有3个：完全与miRNA序列相同、在miRNA与RT引物的交叉点、完全在RT引物上；这其中又有正向和反向互补两种情况。至于探针要设计在那个位置，根据自己试验情况而定，本人以为效果都差不多。 四、试验操作流程
吸虫卵：为常见寄生蠕虫卵中最小的。黄褐色，形如芝麻或灯泡状，前端稍窄，有一小盖及肩峰，后端钝圆，有一逗点状突起。卵内含一毛蚴。 （6）猪绦虫卵：黄褐色，圆形。胚膜厚，具辐射状条纹，内含1个六钩蚴。在粪便中查见的虫卵，其卵壳多已脱落。 五、示范 （一）蛲虫（Enterobius vermicularis）：寄生于人的盲肠、阑尾、结肠与小肠附近。虫体白色，细线头状，雌虫较长，后端细尖；雄虫较短，尾部卷曲。妊娠雌虫多于夜间移行于肛门和会阴附近皮肤上产卵。
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