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- 2025年07月11日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
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54
- 英文名：
Aeromonas salmonicida
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海一研
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
50T
荧光定量PCR试剂盒技术：
本实用新型专利技术公开了一种实时荧光定量PCR试剂盒，包括盒体，盒体由上盒体和下盒体组成，上盒体的底面上设有限位凸起，下盒体的顶面上设有与限位凸起匹配的凹槽，且在下盒体左右侧壁的下端均软连接有侧盖，侧盖远离下盒体的一端连接有卡勾，下盒体的上端边缘处设有环形凸起，两个卡勾分别勾住环形凸起的左右两端将上盒体固定在下盒体上；凹槽的内部设有固定杆，固定杆上通过转动件转动连接有用于放置试管的试管架；下盒体的左右两侧均设置有收纳槽。本实用新型专利技术通过将盒体分为上下组合的两个部分，并将两个部分通过侧盖连接，即可保证试剂盒的便携性，同时使用试剂盒自带的试管可提高检测的效率。
产品名称：灭鲑气单胞菌探针法荧光定量PCR试剂盒
英文名称：Aeromonas salmonicida
编号：EY00P3659
分类：探针荧光定量PCR试剂盒
储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。
运输：低温、避光，快递免费送货上门。
主要特征：
准确性高：创新的ASL Probe修饰探针和高特异性SNP Ligase有力的保证了分型的准确率。
重复性好：该分型体系经过反复验证和优化，获得的数据重复性极好。
低成本：无需合成大量昂贵的双标探针。
无需高质量的基因组DNA：粗提物即可进行实验操作。便于快速大量制备基因组DNA。通常386个全血DNA可在30min内制备完毕。
操作简单：简单易懂、结果清晰的分型判断标准，在PCR仪充足的情况下，单人可轻松完成超过3860个SNP数据分析。
应用：
分子标记辅助育种
遗传疾病诊断
致病候选基因研究
药物筛选研究
群体遗传研究
产品特点
1. 使用化学修饰的热启动聚合酶，反应特异性高，*程度地避免了非特异扩增；
2. 反应缓冲液经充分优化，反应灵敏快速，40个循环只需20多分钟；
3. 抗干扰能力强，反应重复性高，适合对土壤、粪便、肿瘤和血液来源的复杂样本中的靶基因进行检测分析。
在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，zui后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。
特异性荧光标记：
TaqMan法
TaqMan探针的特性：
（1）5′端标记有报告基团（Reporter, R），如FAM、VIC等
（2）3′端标记有荧光淬灭基团 （Quencher, Q）
（3）探针完整，R所发射的荧光能量被Q基团吸收 ，无荧光， R与Q分开，发荧光
（4）Taq酶有 5′→3′外切核酸酶活性，可水解探针
相对定量通过内标定量：
内标（Endogenous Control）通常是β-actin、GAPDH基因等看家基因，在细胞中的表达量或在基因组中的拷贝数恒定，受环境因素影响小，内标定量结果代表了样本中所含细胞或基因组数量。
相对定量分析方法 ：
2-ΔΔCt
前提：目标序列和内参序列的扩增效率接近100％且偏差在5％以内
1、用内参基因的CT值归一目标基因的CT值：
ΔCT（test）= CT（target,test）-CT（ref,test）
ΔCT（calibrator）= CT（target,calibrator）-CT（ref, calibrator）
2、用校准样本的ΔCT值归一试验样本的ΔCT值：
ΔΔCT= ΔCT（test） - ΔCT（calibrator）
3、计算表达水平比率：
2 –ΔΔCT=表达量的比值
几种传统荧光定量PCR方法简介：
1）灭鲑气单胞菌探针法荧光定量PCR试剂盒内参照法：
在不同的PCR反应管中加入已定量的内标和引物，内标用基因工程方法合成。上游引物用荧光标记，下游引物不标记。在模板扩增的同时，内标也被扩增。在PCR产物中，由于内标与靶模板的长度不同，二者的扩增产物可用电泳或高效液相分离开来，分别测定其荧光强度，以内标为对照定量待检测模板。
2）竞争法：
选择由突变克隆产生的含有一个新内切位点的外源竞争性模板。在同一反应管中，待测样品与竞争模板用同一对引物同时扩增（其中一个引物为荧光标记）。扩增后用内切酶消化PCR产物，竞争性模板的产物被酶解为两个片段，而待测模板不被酶切，可通过电泳或高效液相将两种产物分开，分别测定荧光强度，根据已知模板推测未知模板的起始拷贝数。
3）PCR－ELISA法：
利用生物素等标记引物，扩增产物被固相板上特异的探针所结合，再加入抗或生物素酶标抗体－辣根过氧化物酶结合物，最终酶使底物显色。常规的PCR－ELISA法只是定性实验，若加入内标，作出标准曲线，也可实现定量检测目的。
以下是公司正在促销打折产品：
(+)-2-基-L-丝氨 现货供应 (+)-2-Methyl-L-serine
(-)-樟脑烷(>98.0%(T)) 现货供应 (-)-Camphanic Acid
(-)-盐东莨菪碱(标准品) 现货供应 (−)-Scopolamine hydrochloride
(-)-莨菪碱,L-天仙子胺，澳洲毒茄碱(标准品) 现货供应 (-)-Hyoscyamine
(-)-莨菪碱,L-天仙子胺，L-天仙子碱 现货供应 (-)-Hyoscyamine
(-)-Holostyligone 现货供应 (-)-Holostyligone
(-)-Blebbistatin 现货供应 (-)-Blebbistatin
N,N',N''-三基-1,3,5-三胺(>98.0%(HPLC)(T)) 现货供应 N,N',N''-Triphenyl-1,3,5-benzenetriamine
L-亮氨(标准品) 现货供应 L-Leucine
3,5-二氧基醛(>98.0%(GC)) 现货供应 3,5-Dibenzyloxybenzaldehyde
3-(2-并咪唑基)-7-(二氨基)香豆素(>98.0%(T)) 现货供应 3-(2-Benzimidazolyl)-7-(diethylamino)coumarin
1-碘萘(>98.0%(GC)) 现货供应 1-Iodonaphthalene
DBD-CO-Hz [=4-(N,N-二基氨基磺酰)-7-(N-肼基羰基-N-基)氨基-2,1,3-并恶二唑](>98.0%(HPLC))
现货供应 DBD-CO-Hz [=4-(N,N-Dimethylaminosulfonyl)-7-(N-hydrazinocarbonylmethyl-N-methyl)amino-2,1,3-benzoxadiazole]
5'-O-(4,4'-二氧基三基)-N6-酰基腺苷 现货供应 N6-Benzoyl-5'-O-DMT-adenosine
(R)-(-)-2,2,2-三氟-1-(9-蒽基)醇(>99.0%(GC)) 现货供应 (R)-(-)-2,2,2-Trifluoro-1-(9-ahryl)ethanol
Anti-Lamin B1 Monoclonal Antibody (15T1) , Cy5 Conjugated 核纤层蛋白B1单克隆抗体(15T1) , Cy5偶联
Anti-Lamin B1 Monoclonal Antibody (15T1) , Cy3 Conjugated 核纤层蛋白B1单克隆抗体(15T1) , Cy3偶联
Anti-Lamin B1 Monoclonal Antibody (15T1) , Biotin Conjugated 核纤层蛋白B1单克隆抗体(15T1) , Biotin偶联
Anti-Lamin B1 Monoclonal Antibody (15T1) , AbFluor!" 680 Conjugated 核纤层蛋白B1单克隆抗体(15T1) , AbFluor!" 680偶联
Anti-Lamin B1 Monoclonal Antibody (15T1) , AbFluor!" 647 Conjugated 核纤层蛋白B1单克隆抗体(15T1) , AbFluor!" 647偶联
Anti-Lamin B1 Monoclonal Antibody (15T1) , AbFluor!" 594 Conjugated 核纤层蛋白B1单克隆抗体(15T1) , AbFluor!" 594偶联
Anti-Lamin B1 Monoclonal Antibody (15T1) , AbFluor!" 555 Conjugated 核纤层蛋白B1单克隆抗体(15T1) , AbFluor!" 555偶联
Anti-Lamin B1 Monoclonal Antibody (15T1) , AbFluor!" 488 Conjugated 核纤层蛋白B1单克隆抗体(15T1) , AbFluor!" 488偶联
Anti-Lamin B1 Monoclonal Antibody (15T1) , AbFluor!" 405 Conjugated 核纤层蛋白B1单克隆抗体(15T1) , AbFluor!" 405偶联
Anti-Lamin B1 Monoclonal Antibody (15T1) , AbFluor!" 350 Conjugated 核纤层蛋白B1单克隆抗体(15T1) , AbFluor!" 350偶联
灭鲑气单胞菌探针法荧光定量PCR试剂盒沙氏BHI琼脂 250用于真菌检测(Acumedia 方法)
菌种培养基 250用于四环素检定中蜡样芽孢杆菌的培养(SN标准)
四环素检定琼脂 250用于四环素残留的微生物学检定(SN标准)
葡萄糖胰蛋白胨琼脂 250用于嗜热菌芽孢(需氧芽孢总数、平酸芽孢和厌氧芽孢)分离培养(SN标准)
弯曲菌
布氏琼脂 250用于弯曲杆菌分离(SN标准)
麦芽浸膏汤Malt Extract Broth用于酸性罐头食品商业无菌检验
锰盐营养琼脂Mn2+Nutrient Agar用于嗜热需氧芽孢杆菌的检验
疱肉培养基基础Cooked Meat Medium Base加入牛肉粒，用于肉毒梭菌及厌氧梭状芽孢杆菌的检验
卵黄琼脂基础Egg Yolk Agar Base加入卵黄，用于厌氧梭状芽孢杆菌的分离培养
疱肉牛肉粒Dried Meat Particle加入疱肉基础，配成疱肉培养基
内标对荧光定量PCR的影响：
1．实时荧光定量PCR无需内标实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限，实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度，并记录在电脑软件之中，通过对每个样品Ct值的计算，根据标准曲线获得定量结果。因此，实时荧光定量PCR无需内标是建立在两个基础之上的：
1）Ct值的重现性PCR循环在到达Ct值所在的循环数时，刚刚进入真正的指数扩增期（对数期），此时微小误差尚未放大，因此Ct值的重现性极好，即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值与起始模板的线性关系由于Ct值与起始模板的对数存在线性关系，可利用标准曲线对未知样品进行定量测定，因此，实时荧光定量PCR是一种采用外标准曲线定量的方法。
2．内标对实时荧光定量PCR的影响若在待测样品中加入已知起始拷贝数的内标，则PCR反应变为双重PCR，双重PCR反应中存在两种模板之间的干扰和竞争，尤其当两种模板的起始拷贝数相差比较大时，这种竞争会表现得更为显著。但由于待测样品的起始拷贝数是未知的，所以无法加入合适数量的已知模板作为内标。也正是这个原因，传统定量方法虽然加入内标，但仍然只是一种半定量的方法。
本实用新型专利技术公开了一种实时荧光定量PCR试剂盒，包括盒体，盒体由上盒体和下盒体组成，上盒体的底面上设有限位凸起，下盒体的顶面上设有与限位凸起匹配的凹槽，且在下盒体左右侧壁的下端均软连接有侧盖，侧盖远离下盒体的一端连接有卡勾，下盒体的上端边缘处设有环形凸起，两个卡勾分别勾住环形凸起的左右两端将上盒体固定在下盒体上；凹槽的内部设有固定杆，固定杆上通过转动件转动连接有用于放置试管的试管架；下盒体的左右两侧均设置有收纳槽。本实用新型专利技术通过将盒体分为上下组合的两个部分，并将两个部分通过侧盖连接，即可保证试剂盒的便携性，同时使用试剂盒自带的试管可提高检测的效率。
产品名称：灭鲑气单胞菌探针法荧光定量PCR试剂盒
英文名称：Aeromonas salmonicida
编号：EY00P3659
分类：探针荧光定量PCR试剂盒
储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。
运输：低温、避光，快递免费送货上门。
主要特征：
准确性高：创新的ASL Probe修饰探针和高特异性SNP Ligase有力的保证了分型的准确率。
重复性好：该分型体系经过反复验证和优化，获得的数据重复性极好。
低成本：无需合成大量昂贵的双标探针。
无需高质量的基因组DNA：粗提物即可进行实验操作。便于快速大量制备基因组DNA。通常386个全血DNA可在30min内制备完毕。
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应用：
分子标记辅助育种
遗传疾病诊断
致病候选基因研究
药物筛选研究
群体遗传研究
产品特点
1. 使用化学修饰的热启动聚合酶，反应特异性高，*程度地避免了非特异扩增；
2. 反应缓冲液经充分优化，反应灵敏快速，40个循环只需20多分钟；
3. 抗干扰能力强，反应重复性高，适合对土壤、粪便、肿瘤和血液来源的复杂样本中的靶基因进行检测分析。
在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，zui后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。
特异性荧光标记：
TaqMan法
TaqMan探针的特性：
（1）5′端标记有报告基团（Reporter, R），如FAM、VIC等
（2）3′端标记有荧光淬灭基团 （Quencher, Q）
（3）探针完整，R所发射的荧光能量被Q基团吸收 ，无荧光， R与Q分开，发荧光
（4）Taq酶有 5′→3′外切核酸酶活性，可水解探针
相对定量通过内标定量：
内标（Endogenous Control）通常是β-actin、GAPDH基因等看家基因，在细胞中的表达量或在基因组中的拷贝数恒定，受环境因素影响小，内标定量结果代表了样本中所含细胞或基因组数量。
相对定量分析方法 ：
2-ΔΔCt
前提：目标序列和内参序列的扩增效率接近100％且偏差在5％以内
1、用内参基因的CT值归一目标基因的CT值：
ΔCT（test）= CT（target,test）-CT（ref,test）
ΔCT（calibrator）= CT（target,calibrator）-CT（ref, calibrator）
2、用校准样本的ΔCT值归一试验样本的ΔCT值：
ΔΔCT= ΔCT（test） - ΔCT（calibrator）
3、计算表达水平比率：
2 –ΔΔCT=表达量的比值
几种传统荧光定量PCR方法简介：
1）灭鲑气单胞菌探针法荧光定量PCR试剂盒内参照法：
在不同的PCR反应管中加入已定量的内标和引物，内标用基因工程方法合成。上游引物用荧光标记，下游引物不标记。在模板扩增的同时，内标也被扩增。在PCR产物中，由于内标与靶模板的长度不同，二者的扩增产物可用电泳或高效液相分离开来，分别测定其荧光强度，以内标为对照定量待检测模板。
2）竞争法：
选择由突变克隆产生的含有一个新内切位点的外源竞争性模板。在同一反应管中，待测样品与竞争模板用同一对引物同时扩增（其中一个引物为荧光标记）。扩增后用内切酶消化PCR产物，竞争性模板的产物被酶解为两个片段，而待测模板不被酶切，可通过电泳或高效液相将两种产物分开，分别测定荧光强度，根据已知模板推测未知模板的起始拷贝数。
3）PCR－ELISA法：
利用生物素等标记引物，扩增产物被固相板上特异的探针所结合，再加入抗或生物素酶标抗体－辣根过氧化物酶结合物，最终酶使底物显色。常规的PCR－ELISA法只是定性实验，若加入内标，作出标准曲线，也可实现定量检测目的。
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N,N',N''-三基-1,3,5-三胺(>98.0%(HPLC)(T)) 现货供应 N,N',N''-Triphenyl-1,3,5-benzenetriamine
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3,5-二氧基醛(>98.0%(GC)) 现货供应 3,5-Dibenzyloxybenzaldehyde
3-(2-并咪唑基)-7-(二氨基)香豆素(>98.0%(T)) 现货供应 3-(2-Benzimidazolyl)-7-(diethylamino)coumarin
1-碘萘(>98.0%(GC)) 现货供应 1-Iodonaphthalene
DBD-CO-Hz [=4-(N,N-二基氨基磺酰)-7-(N-肼基羰基-N-基)氨基-2,1,3-并恶二唑](>98.0%(HPLC))
现货供应 DBD-CO-Hz [=4-(N,N-Dimethylaminosulfonyl)-7-(N-hydrazinocarbonylmethyl-N-methyl)amino-2,1,3-benzoxadiazole]
5'-O-(4,4'-二氧基三基)-N6-酰基腺苷 现货供应 N6-Benzoyl-5'-O-DMT-adenosine
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Anti-Lamin B1 Monoclonal Antibody (15T1) , AbFluor!" 594 Conjugated 核纤层蛋白B1单克隆抗体(15T1) , AbFluor!" 594偶联
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Anti-Lamin B1 Monoclonal Antibody (15T1) , AbFluor!" 488 Conjugated 核纤层蛋白B1单克隆抗体(15T1) , AbFluor!" 488偶联
Anti-Lamin B1 Monoclonal Antibody (15T1) , AbFluor!" 405 Conjugated 核纤层蛋白B1单克隆抗体(15T1) , AbFluor!" 405偶联
Anti-Lamin B1 Monoclonal Antibody (15T1) , AbFluor!" 350 Conjugated 核纤层蛋白B1单克隆抗体(15T1) , AbFluor!" 350偶联
灭鲑气单胞菌探针法荧光定量PCR试剂盒沙氏BHI琼脂 250用于真菌检测(Acumedia 方法)
菌种培养基 250用于四环素检定中蜡样芽孢杆菌的培养(SN标准)
四环素检定琼脂 250用于四环素残留的微生物学检定(SN标准)
葡萄糖胰蛋白胨琼脂 250用于嗜热菌芽孢(需氧芽孢总数、平酸芽孢和厌氧芽孢)分离培养(SN标准)
弯曲菌
布氏琼脂 250用于弯曲杆菌分离(SN标准)
麦芽浸膏汤Malt Extract Broth用于酸性罐头食品商业无菌检验
锰盐营养琼脂Mn2+Nutrient Agar用于嗜热需氧芽孢杆菌的检验
疱肉培养基基础Cooked Meat Medium Base加入牛肉粒，用于肉毒梭菌及厌氧梭状芽孢杆菌的检验
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内标对荧光定量PCR的影响：
1．实时荧光定量PCR无需内标实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限，实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度，并记录在电脑软件之中，通过对每个样品Ct值的计算，根据标准曲线获得定量结果。因此，实时荧光定量PCR无需内标是建立在两个基础之上的：
1）Ct值的重现性PCR循环在到达Ct值所在的循环数时，刚刚进入真正的指数扩增期（对数期），此时微小误差尚未放大，因此Ct值的重现性极好，即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值与起始模板的线性关系由于Ct值与起始模板的对数存在线性关系，可利用标准曲线对未知样品进行定量测定，因此，实时荧光定量PCR是一种采用外标准曲线定量的方法。
2．内标对实时荧光定量PCR的影响若在待测样品中加入已知起始拷贝数的内标，则PCR反应变为双重PCR，双重PCR反应中存在两种模板之间的干扰和竞争，尤其当两种模板的起始拷贝数相差比较大时，这种竞争会表现得更为显著。但由于待测样品的起始拷贝数是未知的，所以无法加入合适数量的已知模板作为内标。也正是这个原因，传统定量方法虽然加入内标，但仍然只是一种半定量的方法。
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