嗜水气单胞菌探针法荧光定量PCR试剂盒

【技术保护点】
1.一种实时荧光定量PCR检测EB病毒C/D基因基因分型试剂盒，其特征在于，由定量PCR反应液(1)、C型标准品(2)、D型标准品(3)、阳性对照品(4)、阴性对照品(5)、病毒DNA抽提裂解液(6)、操作说明书(7)、盒体(8)、盒盖(9)组成，其中定量PCR反应液(1)含有PCR缓冲液、Mgcl2、dNTPs、EB病毒C/D基因基因通用上游引物、EB病毒C/D基因基因通用下游引物、C型荧光探针、D型荧光探针、Taq DNA聚合酶，上游引物序列为:5’ATACTCCCGCCATGCGACT3’，下游引物序列为：5’CTGTCACAACCTCACTGTCAT3’C型荧光探针为：5’FAMCCTGCGGACCCCGATMGB 3’，D型荧光探针为：5’VICCCTGCGGATCCCGATMGB 3’。
 

产品名称	嗜水气单胞菌探针法荧光定量PCR试剂盒
英文名称	Aeromonas hydrophila
编号	EY00P3657

嗜水气单胞菌探针法荧光定量PCR试剂盒运输及保存低温运输，-20℃保存，有效期一年。使用本试剂盒提供的阳性对照时，由于其浓度较高，一定要注意不要污染其他试剂和成分。最好在专门的区域操作。

产品及特点:
嗜水气单胞菌探针法荧光定量PCR试剂盒从土壤农杆菌 CP4 菌株中分离得到的抗除草剂草甘膦基因，是转基因植物研究中最为常用的一种筛选标记基因，因此本公司根据探针法 qPCR 原理开发了专门用于检测嗜水气单胞菌探针法荧光定量PCR试剂盒的试剂盒，它具有下列特点：
1. 即开即用，用户只需要提供样品 DNA 模板。
2. 根据嗜水气单胞菌探针法荧光定量PCR试剂盒保守区域设计引物和探针，能专一性地检测出样品中的嗜水气单胞菌探针法荧光定量PCR试剂盒成分，但不能检测其他非嗜水气单胞菌探针法荧光定量PCR试剂盒成分。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. 一管式闭管操作，降低了交叉污染。
5. 快速，整个检测过程（按一个样品计）所需时间仅为 2.0 小时。
6. 本只能用于科研，足够 50 次 20uL 体系的探针法荧光定量 PCR。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：
(1)将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；
(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。
其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。
步骤(2)为：待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为肿瘤或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
技术原理：
DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链，在DNA聚合酶与启动子的参与下，根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝。在聚合酶链式反应实验中发现，DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性，并设计引物做启动子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。（ DNA高温变性低温复性）发现耐热DNA聚合同酶--Taq酶对于PCR的应用有里程碑的意义，该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活，不需要每个循环加酶，使PCR技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本，PCR技术得以大量应用，并逐步应用于临床。
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(3R,5S)-氟伐他汀钠盐  现货供应  (3R,5S)-Fluvastatin Sodium Salt
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(3R,5R)-罗舒伐他汀  现货供应  (3R,5R)-Rosuvastatin
(2S,3R,5S)-5-[(N-酰-L-亮氨酰)氧]-2-己基-3-羟基十六烷(奥利司他杂质)  现货供应  (2S,3R,5S)-5-[(N-Formyl-L-leucyl)oxy]-2-hexyl-3-hydroxyhexadecanoic Acid (Orlistat Impurity)
(2S)-2-N-芴氧羰基氨基-2-基-6-庚烯  现货供应  (S)-N-Fmoc-2-(4'-peenyl)alanine
(1S,4S)-N-去基盐舍曲林  现货供应  (1S,4S)-N-Desmethyl Sertraline Hydrochloride
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(1S,4R)-N-去基盐舍曲林  现货供应  (1S,4R)-N-Desmethyl Sertraline Hydrochloride
MAGB1 Polyclonal Antibody　黑色素瘤相关抗原B1 抗体
MAGA8 Polyclonal Antibody　黑色素瘤相关抗原8 抗体
MAGA6 Polyclonal Antibody　黑色素瘤相关抗原6 抗体
MAGA4 Polyclonal Antibody　黑色素瘤相关抗原4 抗体
MAGA3 Polyclonal Antibody　黑色素瘤相关抗原3 抗体
MAGA2 Polyclonal Antibody　黑色素瘤相关抗原2 抗体
MAGAC Polyclonal Antibody　黑色素瘤相关抗原12 抗体
MAGAB Polyclonal Antibody　黑色素瘤相关抗原11 抗体
MIA3 Polyclonal Antibody　黑色素瘤活性抑制蛋白3 抗体
MIA Polyclonal Antibody　黑色素瘤活性抑制蛋白 抗体
嗜水气单胞菌探针法荧光定量PCR试剂盒DRBC琼脂　250用于食品中霉菌及酵母菌分离培养
WORT 琼脂　250用于真菌,特别是酵母菌的计数和增菌培养(Merck方法)
WORT 肉汤　250用于真菌,特别是酵母菌的培养(Merck方法)
YGC琼脂　250用于奶和奶制品中霉菌及酵母菌分离培养(ISO方法)
改良绿色酵母菌和真菌肉汤　250用于饮料中真菌及酵母菌检测(Acumedia方法)
Littman 琼脂　250用于真菌的分离培养(Acumedia方法)
胰酪胨大豆酵母浸膏肉汤(TSB-YE)Trypticase Soy-Yeast Extract Broth用于单增李氏菌增菌培养（SN、GB标准）
胰酪胨大豆酵母浸膏琼脂(TSA-YE)Trypticase Soy-Yeast Extract Agar用于单增李氏菌的分纯，培养，可用于做7%羊血琼脂（SN标准）
李氏菌选择性培养基基础(MMA)Modified Mcbride Agar Base用于单增李氏菌选择性分离
糖发酵基础肉汤Bromcresol Purple Broth Base适用于微生物检验中各种糖发酵实验，无菌加入各种糖醇类物质（SN标准）
李氏菌增菌肉汤(LB1,LB2)基础Listeria Enrichment Broth Base添加奈啶酮酸，黄素，即为LB1，LB2，用于李氏菌二步增菌（GB标准）