欧洲放线菌探针法荧光定量PCR试剂盒

技术原理：
DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链，在DNA聚合酶与启动子的参与下，根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝。在聚合酶链式反应实验中发现，DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性，并设计引物做启动子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。（ DNA高温变性低温复性）发现耐热DNA聚合同酶--Taq酶对于PCR的应用有里程碑的意义，该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活，不需要每个循环加酶，使PCR技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本，PCR技术得以大量应用，并逐步应用于临床。
欧洲放线菌探针法荧光定量PCR试剂盒运输及保存低温运输，-20℃保存，有效期一年。使用本试剂盒提供的阳性对照时，由于其浓度较高，一定要注意不要污染其他试剂和成分。最好在专门的区域操作。

产品名称	欧洲放线菌探针法荧光定量PCR试剂盒
英文名称	Actinomyces europaeus
编号	EY00P3643

产品及特点:
欧洲放线菌探针法荧光定量PCR试剂盒从土壤农杆菌 CP4 菌株中分离得到的抗除草剂草甘膦基因，是转基因植物研究中最为常用的一种筛选标记基因，因此本公司根据探针法 qPCR 原理开发了专门用于检测欧洲放线菌探针法荧光定量PCR试剂盒的试剂盒，它具有下列特点：
1. 即开即用，用户只需要提供样品 DNA 模板。
2. 根据欧洲放线菌探针法荧光定量PCR试剂盒保守区域设计引物和探针，能专一性地检测出样品中的欧洲放线菌探针法荧光定量PCR试剂盒成分，但不能检测其他非欧洲放线菌探针法荧光定量PCR试剂盒成分。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. 一管式闭管操作，降低了交叉污染。
5. 快速，整个检测过程（按一个样品计）所需时间仅为 2.0 小时。
6. 本只能用于科研，足够 50 次 20uL 体系的探针法荧光定量 PCR。
【技术保护点】
1.一种实时荧光定量PCR检测EB病毒C/D基因基因分型试剂盒，其特征在于，由定量PCR反应液(1)、C型标准品(2)、D型标准品(3)、阳性对照品(4)、阴性对照品(5)、病毒DNA抽提裂解液(6)、操作说明书(7)、盒体(8)、盒盖(9)组成，其中定量PCR反应液(1)含有PCR缓冲液、Mgcl2、dNTPs、EB病毒C/D基因基因通用上游引物、EB病毒C/D基因基因通用下游引物、C型荧光探针、D型荧光探针、Taq DNA聚合酶，上游引物序列为:5’ATACTCCCGCCATGCGACT3’，下游引物序列为：5’CTGTCACAACCTCACTGTCAT3’C型荧光探针为：5’FAMCCTGCGGACCCCGATMGB 3’，D型荧光探针为：5’VICCCTGCGGATCCCGATMGB 3’。


荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：
(1)将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；
(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。
其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。
步骤(2)为：待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为肿瘤或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
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1-杂-15-冠-5-醚(>98.0%(T))  现货供应  1-Aza-15-crown 5-Ether
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1-基D-谷氨  现货供应  1-Benzyl D-Glutamate
1-基-5-巯基四唑(>98.5%,BR)  现货供应  1-Phenyl-1H-tetrazole-5-thiol
TSHR Polyclonal Antibody　甲状腺刺激激素受体 抗体
PTH2R Polyclonal Antibody　甲状旁腺激素2受体 抗体
HAVR2 Polyclonal Antibody　甲型肝炎病毒细胞受体2 抗体
FPR2 Polyclonal Antibody　甲酰肽受体2 抗体
AFP alpha 1 Fetoprotein Monoclonal Antibody　甲胎蛋白alpha 1 Fetoprotein 单克隆抗体
MeCP2 Polyclonal Antibody　甲基CpG结合蛋白2抗体
TIM-1 Polyclonal Antibody　甲肝病毒细胞受体1 抗体
THOP1 Polyclonal Antibody　寡肽酶1/Thimet脱寡肽酶1 抗体
PREP Polyclonal Antibody　加溶金属蛋白酶1 抗体
SPON1 Polyclonal Antibody　脊椎蛋白1 抗体
欧洲放线菌探针法荧光定量PCR试剂盒葡萄球菌选择性琼脂    250用于凝固酶阳性葡萄球菌的选择性分离培养
北沙参胨水培养基基础　250用于金黄色葡萄球菌的增菌培养。每100ml培养基需另加入1%0.2ml
葡萄球菌选择性琼脂110(CHAPMAN 琼脂)　250用于金黄色葡萄球菌的分离培养
甘露醇卵黄培养基基础　250用于金黄色葡萄球菌的分离培养(Japan方法)
V-J琼脂　250病源标本和其它标本中甘露醇阳性金黄色葡萄球菌的选择性分离(Merck方法)
改良Giolitti-Cantobi 肉汤　250用于金黄色葡萄球菌的增菌培养
菌种培养基Strain Medium(for B.Cereus)用于四环素检定中蜡样芽孢杆菌的培养(SN标准)
四环素检定琼脂Tetracyline Examination Agar用于四环素残留的微生物学检定(SN标准)
盐琼脂Sulfite Agar用于厌氧盐还原杆菌的试管计数(SN标准)
改良盐琼脂Sulfite Agar，modified用于嗜热菌芽孢(需氧芽孢总数、平酸芽孢和厌氧芽孢)的计数(SN标准)
葡萄糖胰蛋白胨琼脂Glucose Tryptone Agar用于嗜热菌芽孢(需氧芽孢总数、平酸芽孢和厌氧芽孢)分离培养(SN标准)