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文献和实验。其他操作同多氯联苯诱导。S9 组分制成后,经无菌检查,测定蛋白含量 (Lowry 法),每毫升蛋白含量不超过 40 mg 为宜,并经间接致突变剂鉴定其生物活性合格后贮存于- 80°C 低温或冰冻干燥,保存期不超过 1 年。1.2.3 S9 混合液的制备S9 混合液浓度一般为 1%~10%,实际使用浓度可由各实验室决定,但需对其活性进行鉴定,必须能明显活化阳性对照物,且对细胞无明显毒性。一般由 S9 组分和辅助因子按 1:9 组成 10% 的 S9 混合液,无菌现用现配。10%S9 混合液 10 mL
或者互作蛋白复合物(红色+黄色)洗脱 Step 5:分析检测—Western Blot 或者质谱 常用“黑话” 以上示例图证明了 EDR1 和 EDR4 有相互作用。如果想要设计好实验,先清楚以下常用“黑话”含义。 阳性对照:证实细胞裂解物中确实存在靶蛋白(IP)或者互作蛋白对(co-IP,比如诱饵蛋白X和靶蛋白 Y),即为常说的 input。可直接取抽好的蛋白溶液进行 Western。 阴性对照:用来排除假阳性。IP/co-IP 后靶蛋白或者互作蛋白对都检测到了,固然是值得高兴
(150 mM)以及0.5g叠氮化钠(0.05%)溶于1L蒸馏水中,并用HCl调节pH 7.4。 ⑵ 中和缓冲溶液:121.2g Tris (1 M), 87.8g NaCl (1.5 M), 0.37g EDTA (1mM)及5g叠氮化钠(0.5%)溶于1L蒸馏水中,并用HCl调节pH8.0。 ⑶ 洗脱缓冲溶液(pH2.7):将3.75g甘氨酸(50 mM)溶解于1L蒸馏水中,用HCl调节pH 2.7。 【实验方法】 ⒈ 准备蛋白
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