Quick血液基因组DNA快速提取试剂盒

Quick血液基因组DNA快速提取试剂盒
规格价格：50次/572.00元
规格价格：100次/1021.00元

产品组分

 

货号	KL1131 （50次）	KL1132 （100次）
消化缓冲液DS	15 ml	30 ml
裂解液QS	20 ml	40 ml
蛋白酶K	1 ml	2 ml
去蛋白液PS	30 ml	60 ml
漂洗液PE	15 ml	30 ml
纯化液TE	5 ml	10 ml
DNA纯化柱	50个	100个
说明书	1份	1份

 

● 裂解液MS中含变性剂，请不要直接接触皮肤。

● 漂洗液PE初次使用前用无水乙醇按1: 3稀释，即含75%乙醇。

产品说明

本产品可直接用于全血样本的基因组DNA的快速纯化。与传统的血液基因组DNA纯化试剂盒相比，本产品无需去除血液中的红细胞，可直接裂解全血纯化基因组DNA，从而更加便捷、高效。其纯化原理是利用独特的细胞裂解液直接裂解细胞核释放基因组DNA，由硅胶膜柱可逆吸附体系中的基因组DNA，经蛋白酶消化、漂洗液清洗除去蛋白质、脂质以及多糖等杂质，用纯化液洗脱获得基因组DNA。本产品适用于未凝固全血，以及经各种抗凝剂（EDTA、肝素、柠檬酸）处理过的全血样本。一次可从少于200 μl全血中中提取到5 μg的高纯度基因组DNA（OD₂₆₀/OD₂₈₀=1.7-1.9），此基因组DNA可直接用于PCR、酶切等后续实验。

 

质量控制

纯化的基因组DNA质量通过限制性酶切和单拷贝基因的PCR扩增鉴定。

 

保存条件

蛋白酶K室温运输，于-20℃保存，避免反复冻融。

其余试剂置于室温（15-25℃）干燥条件下保存1年。

如果消化缓冲液DS和MS中有沉淀，可在55℃加热溶解，待恢复室温后混匀即可使用。不会影响基因组DNA的纯化效率。

 

注意事项--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

● 漂洗液PE第一次使用前请按瓶上标签加入3倍体积的无水乙醇，即15 ml漂洗液PE加入45 ml无水乙醇，30 ml漂洗液PE加入90 ml无水乙醇，使用后立即盖紧盖子。

● 消化缓冲液DS和裂解液MS室温保存可能会有沉淀产生，在55℃加热溶解，待恢复至室温后混匀即可使用。不会影响基因组DNA纯化效率。

● 柠檬酸、EDTA和肝素三种抗凝剂均可使用，但肝素对酶促反应有可能起抑制作用。采血时如没有特殊要求，请使用柠檬酸或EDTA处理血样。

● 基因组DNA的得率，会因抗凝剂的种类以及血液保存条件的不同而各异。

● 基因组DNA需长期保存时，建议使用纯化液TE，用无菌的离心管分装后保存于-20℃或-80℃。

● 所有离心步骤均为室温下进行。

● 请严格按照操作步骤操作。

操作步骤--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

1  取全血样品，每220 μl加入到一只1.5 ml离心管内。如果不足220 μl可用缓冲液DS补足。

   ● 对于哺乳动物全血，每200 μl全血中可提取1.5-5 μg的基因组DNA。如从鸟类、两栖类或更低级的动物血液中提取基因组DNA，因其血液中红细胞有细胞核，血液用量勿超过20 μl/离心管，每20 μl全血中可提取40 μg的基因组DNA。

   ● 如需要去除RNA，可加入4 μl RNase A（100 mg/ml，N9042）溶液，振荡混匀，室温放置5min。

2  加入20 μl蛋白酶K和220 μl裂解液QS，65℃温浴10-15min，溶液应呈黑色，简短离心以去除管盖内壁的水珠，室温放置5min使溶液冷却。

3  加入220 μl无水乙醇，上下颠倒混匀，此时可能出现絮状沉淀，简短离心以去除管盖内壁的水珠。将溶液及絮状沉淀转移到纯化柱中，12,000 rpm离心1min，弃滤液。

   ● 若溶液体积大于纯化柱容积（700 μl），可分两次离心。

● 此时基因组DNA被吸附于DNA纯化柱中的硅胶膜上。

4  加入500 μl去蛋白液PS，12,000 rpm离心1min，弃滤液。

  ● 此步骤的作用是去除硅胶膜上吸附的蛋白、脂质等杂质，以获得高质量基因组DNA。

5  加入500 μl漂洗液PE，12,000 rpm离心1min，弃滤液。

 ● 漂洗液PE初次使用前用无水乙醇按1: 3稀释，即含75%乙醇。

6  加入500 μl漂洗液PE，12,000 rpm离心1min，弃滤液。

7  12,000 rpm离心3min，以彻底去除纯化柱中残留的液体。

   ● 此步骤的作用是去除残留乙醇，避免影响后续的酶促反应（PCR或酶切），同时利于基因组DNA充分溶解。

8  将纯化柱置于新的1.5 ml离心管中。向纯化柱中央处，悬空滴加30-100 μl洗脱液TE，室温放置2min。

9  12,000 rpm离心2min，管底即为高纯度基因组DNA，-20℃保存。

   ● 洗脱液TE可用去离子水代替，但其pH需为8.0-8.5。

● 对洗脱液TE 65℃预热，会提高基因组DNA的产量。