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49
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RIPA Lysis Buffer For Co-IP/IP
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详见说明书
- 供应商:
上海一研
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低温
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100ml
英文名称:RIPA Lysis Buffer For Co-IP/IP
产品规格:100ml
发货周期:1~3天
对目的蛋白进行检测分析时,总蛋白的提取至关重要,如蛋白提取不好会导致后续试验的不理想甚至失败,如:信号极弱或无杂交信号、背景高、非特异性条带多等.根据目标蛋白的类型和实验应用种类来选择合适的RIPA裂解液,才能最大程度地保证后续实验的成功。Co-IP/IP RIPA Lysis Buffer对细胞有一定的裂解能力,能获得较多的胞浆蛋白,而对细胞核的裂解能力有限,不能完全裂解细胞核,因此获得的总蛋白适用于IP或CO-IP实验。
产品特点:
1.可很好的释放胞浆蛋白,部分释放膜蛋白和核蛋白。
2.经Co-IP/IP RIPA Lysis Buffer,核蛋白与DNA还紧密结合在一起,离心后会造成核蛋白的丢失。
3.对于膜蛋白,Co-IP/IP RIPA Lysis Buffer的破坏力小,不能使膜蛋白与膜充分分离,故离心后造成膜蛋白的丢失。
储存条件:置于室温阴凉处,可保存2年。
RIPA裂解缓冲液(Co-IP/IP) 使用注意事项
1. 微量试剂取用前请离心集液。
2. Annexin V-EGFP,Propidium Iodide(PI)避光保存及使用。
3. Propidium Iodide (PI)有毒,操作时请戴手套。
4. 本试剂盒适用于检测活细胞,流式细胞仪检测时,细胞数量不应低于1×105,,不推荐用于检测组织样本。
5. 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞,需用不含EDTA的胰酶消化,如消化不当,可能引起假阳性,而用细胞刮子会造成细胞粘连成团,而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA的PBS中,防止进一步的损伤。
6. 细胞固定后可能导致荧光的淬灭,请不要固定样品。
7. 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同,因而流式检测的荧光补偿也不同,因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照,进行荧光补偿的调节。
使用说明
1. 细胞的增殖和细胞毒实验,一般可在96孔细胞培养板中进行。
2. 每孔加入100微升细胞悬液。细胞的数量取决于实验目的和培养时间。增殖实验每孔通常加入103个以上数量的细胞;细胞毒性实验每孔至少加入5x103个或以上数量的细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等因素确定)。
3. 接种的细胞按照实验需要,送入细胞培养箱进行培养。增殖实验通常要给予0-10微升特定的药物或生长因子进行刺激。细胞毒实验通常要给予0-10微升抑制因子或细胞毒药物;
4.培养结束后,每孔加入20微升MTT溶液,在细胞培养箱内继续孵育3-6小时;
5.孵育结束后,每孔加入100微升Formanzan溶解液,在37℃细胞培养箱内再继续孵育,直至在镜下观察formazan全部溶解。通常37℃孵育4小时左右,紫色结晶会全部溶解。如果紫色结晶较小较少,溶解的时间会短一些。如果紫色结晶较大较多,溶解的时间会略长。
6. 在570nm测定吸光度。如无570nm滤光片, 560-600nm范围的滤光片均可使用。
DPT rabbit polyclonal antibody反应物种:Human, Mouse测试范围:ELISA, IHC包装:100 ul
LGALS2 rabbit polyclonal antibody反应物种:Human测试范围:ELISA, IHC包装:100 ul
ADIPOQ rabbit polyclonal antibody反应物种:Human, Mouse测试范围:ELISA, WB包装:100 ul
C3AR1 rabbit polyclonal antibody反应物种:Human测试范围:ELISA, IHC包装:100 ul
AGR3 rabbit polyclonal antibody反应物种:Human, Mouse测试范围:ELISA, IHC包装:100 ul
CAMTA1 rabbit polyclonal antibody反应物种:Human, Mouse测试范围:ELISA, IHC包装:100 ul
SPTLC1 rabbit polyclonal antibody反应物种:Human测试范围:ELISA, IHC包装:100 ul
CRHR1 rabbit polyclonal antibody反应物种:Human测试范围:ELISA, IHC包装:100 ul
UBQLN1 rabbit polyclonal antibody反应物种:Human, Mouse, Rat测试范围:ELISA, WB, IHC包装:100 ul
EPCAM rabbit polyclonal antibody反应物种:Human, Mouse, Rat测试范围:ELISA, IHC包装:100 ul
DDX23 rabbit polyclonal antibody反应物种:Human测试范围:ELISA, IHC包装:100 ul
CACNA1E rabbit polyclonal antibody反应物种:Human, Mouse, Rat测试范围:ELISA, IHC包装:100 ul
TPM1 rabbit polyclonal antibody反应物种:Human, Mouse, Rat测试范围:ELISA, WB, IHC包装:100 ul
CRLF2 rabbit polyclonal antibody反应物种:Human测试范围:ELISA, IHC包装:100 ul
EPHA4 rabbit polyclonal antibody反应物种:Human, Mouse测试范围:ELISA, IHC包装:100 ul
Yadanzioside I鱼精DNA 分子式:C28H34O8 性状:Powder 纯度:95.0%
Dehydrobruceantin鲑鱼精DNA 分子式:C26H32O6 性状:Powder 纯度:98.0%
Bruceantinol5-氟脱氧胞苷 分子式:C30H50O2 性状:Powder 纯度:%
Bruceine B5-氟-2‘-脱氧尿苷;氟尿苷 分子式:C30H50O 性状:Powder 纯度:98.0%
Yadanziolide A鸟苷;鸟嘌呤核苷 分子式:C36H42O8 性状:Powder 纯度:98.0%
Methyl 2α-hydroxyhardwickiate鸟嘌呤核苷(标准品) 分子式:C30H36O9 性状:Powder 纯度:98.0%
Dehydrohautriwaic acidGDPNa2;5’-二磷酸鸟苷二钠 分子式:C32H42O8 性状:Powder 纯度:97.5%
Phlogacanthoside ASU11274 分子式:C32H42O8 性状:Powder 纯度:97.0%
Goshonoside F5尿苷;尿嘧啶核苷 分子式:C30H48O 性状:Powder 纯度:95.0%
RIPA裂解缓冲液(Co-IP/IP) 中文名称 蛋白质二硫键异构酶抗体
别 名 Pancreatic protein disulfide isomerase; PDA2; PDI; PDIA2; PDIP; Protein disulfide isomerase A2; Protein disulfide isomerase; Protein disulfide isomerase family A member 2; PDIA2_HUMAN.
浓 度 1mg/1ml
规 格 0.2ml/200μg
抗体来源 Rabbit
克隆类型 polyclonal
交叉反应 Human, Mouse, Rat
产品类型 一抗
研究领域 肿瘤 细胞生物 免疫学
蛋白分子量 predicted molecular weight: 56kDa
性 状 Lyophilized or Liquid
免 疫 原 KLH conjugated synthetic peptide derived from human PDIA2/PDI
亚 型 IgG
纯化方法 affinity purified by Protein A
储 存 液 0.01M PBS, pH 7.4 with 10 mg/ml BSA and 0.1% Sodium azide
产品应用 WB=1:100-500 ELISA=1:500-1000 IP=1:20-100 IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 IF=1:100-500
(石蜡切片需做抗原修复)
not yet tested in other applications.
optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user.
保存条件 Store at -20 °C for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles. The lyophilized antibody is stable at room temperature for at least one month and for greater than a year when kept at -20°C. When reconstituted in sterile pH 7.4 0.01M PBS or diluent of antibody the antibody is stable for at least two weeks at 2-4 °C.
Important Note This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.
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文献和实验或者互作蛋白复合物(红色+黄色)洗脱 Step 5:分析检测—Western Blot 或者质谱 常用“黑话” 以上示例图证明了 EDR1 和 EDR4 有相互作用。如果想要设计好实验,先清楚以下常用“黑话”含义。 阳性对照:证实细胞裂解物中确实存在靶蛋白(IP)或者互作蛋白对(co-IP,比如诱饵蛋白X和靶蛋白 Y),即为常说的 input。可直接取抽好的蛋白溶液进行 Western。 阴性对照:用来排除假阳性。IP/co-IP 后靶蛋白或者互作蛋白对都检测到了,固然是值得高兴
紫叶竹韵 做IP,之后Western 分析,看到有两条带,在25和50KD左右,应该是抗体的两条带,但是我的目的蛋白也是52KD的,这该怎么区分呢。 woxingwosu 最好是选择与做IP不同来源的抗体来做(比如说IP用鼠的抗体,WB就用兔的抗体),这样就不会检测到抗体的两条带。 如果没有不同来源的抗体的话,就要做IP的时候尽量少放点抗体,跑胶跑得远一点,使得目的蛋白能够被看到,不过由于你的蛋白是在是太接近重链
一、原理: 免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,Co-IP)技术是检测蛋白质间相互作用的经典方法,基本原理是以细胞内源性靶蛋白为诱饵,将靶蛋白抗体与细胞总蛋白进行共孵育,促进免疫复合物的形成;随后加入能够与抗体Fc段结合的proreinA/G(预先结合固化在琼脂糖小珠上),形成“结合蛋白-靶蛋白-靶蛋白抗体-proteinA/G小珠”复合物,纯化该复合物后凝胶电泳分离蛋白,应用Westernblot或者质谱技术鉴定靶蛋白的结合蛋白。 与其它研究方法相比,免疫
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