诺如病毒GⅠ型、GⅡ型RNA核酸检测试剂盒（IAC,PCR-

诺如病毒GⅠ型、GⅡ型RNA核酸检测试剂盒（IAC,PCR-荧光探针法）
诺如病毒 GI 型、GII 型 RNA核酸检测试剂盒（一管式 IAC，PCR-荧光探针法）
◆ 产品说明
诺如病毒 GI 型、GII 型 RNA核酸检测试剂盒（PCR-双色荧光法）参照 GB 4789.42-2016《食品安全国家标准 食品微生物学检验 诺如病毒检验》进行设计，可于一个反应中同时检测 GI 型、GII 型诺如病毒；适用于贝类，生食蔬菜，胡萝卜、瓜、坚果等硬质表面食品，草莓、西红柿、葡萄等软质水果等食品中 GI 型、GII 型诺如病毒核酸的检测。
◆ 产品组成（48 测试）
试剂 含量
A-GIGII 20μL× 7 管× 4 排
IAC-Nor 20μL× 5 管× 4 排
B-Nor 500μL × 1 支
NG-P 100μL × 2 支
PG-Nor 100μL × 1 支
◆ 适用仪器
ABI 系列、MJ 系列、Roche 系列、博日系列以及其它荧光定量 PCR 检测仪（可同时检测 FAM 通道（494 nm）、VIC通道（538nm）两种通道的荧光定量 PCR 仪）。
◆ 自备耗材和仪器
①冰盒；②移液器（1-10μL，10-100μL，100-1000μL）及配套灭菌吸头（RNase free）；③离心机；④涡旋混匀器。

◆ 注意事项
1．本试剂检测灵敏度高。为了防止污染，实验要分区操作。
1）第一区：样本制备区。
2）第二区：扩增及产物分析区。
★ 分区之间最好进行物理性隔离，避免人为因素造成的污染。
2．实验过程中穿戴工作服和乳胶手套，不同区域独立使用工具，需更换手套和实验服。
3．严格按照操作步骤操作，试剂配制和加样等步骤请严格按照说明书要求在冰盒上操作。
4．反应液中的成分对光敏感，应避光保存。试剂使用前要完全解冻，但应避免反复冻融，推荐使用前离心 30秒，并按检测频次将反应液以适当体积分管保存。
5．反应结束后，扩增管请置于密封袋内丢弃，当日清理，开盖易造成气溶胶污染，禁止开盖。
6．不同批号试剂请勿混合使用，在有效期内使用。
◆ 试剂盒组分及样品处理说明
（1）样品前处理请参照 GB 4789.42-2016《食品安全国家标准 食品微生物学检验 诺如病毒检验》进行样品前处理。
（2）A-GIGII 为 GI、GII 反应液，含有诺如病毒 GI 型、GII 型引物探针。
（3）IAC-Nor 为过程控制反应液，含有过程控制病毒引物探针。
（4）B-Nor 为提取过程控制液，进行样品 RNA 提取时请参照国标法加入 10 μL B-Nor 作为提取过程控制；亦可参照国标法另取 50-100 μL B-Nor，用 PBS 缓冲液补足至 200 μL，进行核酸提取、标准曲线制作及计算提取效率。
（5）NG-P 为阴性对照，也可参照国标法提取阴性样品核酸作为阴性对照进行实验。
（6）PG-Nor 含 GI 型、GII 型诺如病毒核酸，可作为阳性对照，亦可参照国标法作为扩增控制计算抑制指数。
*推荐使用的病毒基因组 DNA/RNA 提取试剂盒中的方案进行病毒 RNA 的提取，或者采用其他等效产品进行 RNA 提取。
◆ 实验操作（推荐）
请于-20℃条件下保存，有效期 12 个月
1. 反应体系配制（样本制备区）
剪下所需测试数的已含有反应液的 PCR 管，并参照下表进行编号，放置在室温待解冻后，离心 30 秒后揭开封口膜，使用穿刺加样法穿过固封层向每管反应液中分别加入模板。
孔编号 实验意义 反应液 加入模板
A 空白对照 A-GIGII 5μL RNase free water
B 阴性对照 A-GIGII 5μL 阴性对照
C 病毒提取过程控制 1 IAC-Nor 5μL 样品 RNA
D 病毒提取过程控制 2 IAC-Nor 5μL 过程控制病毒 RNA
E 病毒提取过程控制 3 IAC-Nor 5μL 10
-1倍稀释过程控制病毒 RNA
F 病毒提取过程控制 4 IAC-Nor 5μL 10
-2倍稀释过程控制病毒 RNA
G 病毒提取过程控制 5 IAC-Nor 5μL 10
-3倍稀释过程控制病毒 RNA
H 扩增控制 1 A-GIGII 5μL 样品 RNA+1μL 扩增控制 RNA
I 扩增控制 2 A-GIGII 5μL 10
-1倍稀释样品RNA+1μL扩增控制RNA
J 扩增控制 3 A-GIGII 5μL RNase free water+1μL 扩增控制 RNA
K 样品 1 A-GIGII 5μL 样品 RNA
L 样品 2 A-GIGII 5μL 10
-1倍稀释样品 RNA
配制完成后请盖上 PCR 管盖，涡旋混匀并离心后上机反应。
*请参照上表对管进行编号，以免混淆。
2. 扩增反应（扩增及产物分析区）
使用荧光定量 PCR 仪进行检测，编号 A～B，H～L 使用 FAM 和 VIC 通道，编号 C～G 使用 FAM 通道。按下列条件设置扩增反应：
PCR 循环 荧光收集位点
50℃ 10 分钟 1 个循环 —
95℃ 5 分钟 1 个循环 —
95℃ 10 秒
45 个循环
—60℃ 30 秒 ※
◆ 结果判定
1. 实验有效性判定
（1）实验满足：空白对照阴性（A 反应孔)；阴性对照阴性（B 反应孔）；阳性对照阳性（J 反应孔）；否则本次实验无效，请与本公司技术支持联系。
（2）过程控制（C~G 反应孔）需满足：提取效率≥1%；如提取效率＜1%，需重新检测；但如提取效率＜1%，检测结果为阳性，也可酌情判定为阳性。
（3）扩增控制（H~J 反应孔）需满足：抑制指数＜2.00；如抑制指数≥2.00，需比较 10 倍稀释样品的抑制指数；如 10 倍稀释样品扩增的抑制指数＜2.00，则扩增有效，且需采用 10 倍稀释样品 RNA 的 Ct 值作为结果；10倍稀释样品扩增的抑制指数也≥2.00 时，扩增可能无效，需要重新检测；但如抑制指数≥2.00，检测结果为阳性，也可酌情判定为阳性。
2. 结果判定
待测样品的 Ct 值大于等于 45 时，判定为诺如病毒阴性；待测样品的 Ct 值小于等于 38 时，判定为诺如病毒阳性；待测样品的 Ct 值大于 38，小于 45 时，应重新检测；重新检测结果大于等于 45 时，判定为诺如病毒阴性；小于等于 38 时，判定为诺如病毒阳性。