- ￥380 - 3800
- 百奥莱博
- ALH088-VIF
- 北京
- 2025年07月07日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
375
- 英文名：
A large number of Plasmid Extraction Kit (centrifugal column type)
- 保质期：
12个月
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件：
RT
- 规格：
10次
试剂盒特点：
- 离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
- 不需要使用有毒的苯酚、氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀。快速、方便，从150～300mL大肠杆菌LB((Luria-Bertani)培养液中，可快速提取0.5～2mg纯净的高拷贝质粒DNA，提取率达80%以上。
- 获得的质粒产量高、超螺旋比例高、纯度好，可以直接用于酶切、转化、PCR、体外转录、测序等各种分子生物学实验。
试剂盒组成：
| 组分 | 规格 | 保存 |
| RNaseA（10mg/ml） | 750μL | -20℃ |
| 溶液P1 | 77mL | 4℃ |
| 溶液P2 | 77mL | 室温 |
| 溶液N3 | 77mL | 室温 |
| 漂洗液WB | 2×25mL | 室温 |
| 洗脱缓冲液EB | 20mL | 室温 |
| 吸附柱DC及收集管(50mL) | 10套 | 室温 |
保存：室温储存12个月不影响使用效果。
保存事项：
- 第一次使用时，将试剂盒所带全部的RNase A加入溶液P1后（终浓度100μg/ml）置于4℃保存。如果溶液P1中RNase A失活，提取的质粒可能会有微量RNA残留，在溶液P1中补加RNase A即可。
- 环境温度低时溶液P2中SDS可能会析出出现浑浊或者沉淀，可在37℃水浴加热几分钟，即可恢复澄清，不要剧烈摇晃，以免形成过量的泡沫。
- 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
注意事项：
- 本试剂盒适用菌株为XL-1 Blue、Top10和DH5α等核酸酶含量低缺陷型菌株。所用菌株为JM系列、HB101等endA菌株或野生型菌株，核酸酶含量丰富，应购买本公司生产的高纯度质粒大量快速提取试剂盒(ALH089)。
- 所有的离心步骤如未加另外说明均在室温完成，使用转速可以达到12000×g，带50mL转头的台式离心机。
- 提取质粒的量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。如果所提质粒为低拷贝质粒或大于10kb的大质粒，应加大菌体使用量，同时按比例增加P1、P2、N3的用量，洗脱缓冲液应在70℃预热。可以适当的延长吸附和洗脱的时间，提高提取效率。
- 得到的质粒DNA可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。OD260值为1相当于大约50μg/ml DNA。电泳可能为单一条带，也可能为2条或者多条DNA条带，这主要是不同程度的超螺旋构象质粒泳动位置不一造成，与提取物培养时间长短、提取时操作剧烈程度等有关。本公司产品正常操作情况下基本超螺旋可以超过90%。
- 质粒DNA确切分子大小，必须酶切线性化后，对比DNA分子量Marker才可以知道。
处于环状或者超螺旋状态的质粒，泳动位置不确定，无法通过电泳知道其确切大小。 - 洗脱液EB不含有螯合剂EDTA，不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱，但应该确保pH大于7.5，pH过低影响洗脱效率。用水洗脱，质粒应该保存-20℃。质粒DNA如果需要长期保存，可以用TE缓冲液洗脱（10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH8.0），但是EDTA可能影响下游酶切反应，使用时可以适当稀释。
操作步骤：（实验前请先阅读注意事项）
提示：
① 第一次使用前请先在漂洗液WB瓶中加入指定量无水乙醇，充分混匀，加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!
② 将RNase A全部加入溶液P1中，混匀。每次使用后置于2～8℃保存。
- 取150～200mL (最多不超过300mL)过夜培养的菌液，12000×g（约10000rpm），离心1～2分钟，尽可能的倒干上清，收集菌体。
收集超过50毫升菌液，可以离心弃上清后，在同一个50mL管内加入更多的菌液，重复步骤1，直到收集到足够的菌体。 - 用7.5mL溶液P1重悬菌体沉淀，移液器吹打或者涡旋振荡至彻底悬浮。
如果有未彻底混匀的菌块，会影响裂解，导致提取量和纯度偏低。 - 加7.5mL的溶液P2，温和地上下翻转6～8次使菌体充分裂解，室温放置4～5分钟。
温和地混合，不要剧烈震荡，以免基因组DNA剪切断裂！所用时间不应超过5分钟！以免质粒受到破坏。此时菌液应变得清亮粘稠。如果很浑浊，可能由于菌体过多，裂解不彻底，应减少菌体量。 - 加7.5mL溶液N3，立即温和地上下翻转6～8次，充分混匀此时会出现白色絮状沉淀。12000×g离心10～15分钟，小心取上清至新管，避免吸取到漂浮的白色沉淀。
加入溶液N3后应该立即混匀，以免产生SDS的局部沉淀。 - 向上清中加入0.5体积异丙醇（约10mL）后充分颠倒混匀后分多次（每次不超过15mL）转入吸附柱DC中（吸附柱放入收集管中），12000×g离心1分钟，倒掉收集管中的废液。直到所有混合溶液通过此吸附柱。
- 加入10mL漂洗液WB（请先检查是否已加入无水乙醇!），12000×g离心1分钟，弃掉废液。再加入10mL漂洗液WB，重复漂洗一次。
- 将吸附柱DC放回空收集管中，最高速（最好大于12000×g）离心2分钟以干燥基质膜上残留乙醇。
该步骤为彻底去除吸附柱中残留乙醇，残留乙醇抑制下游反应并且严重降低洗脱效率，降低质粒产量。 - 取出吸附柱DC，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加1～2mL洗脱缓冲液EB（洗脱缓冲液事先在65～70℃水浴中预热可提高产量），室温放置2分钟，12000×g离心1～2分钟。
推荐：为了增加质粒的回收效率，可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，室温放置1分钟，12000×g离心1～2分钟。洗脱两遍可提高浓度约10%。
洗脱体积越大，洗脱效率越高，如果需要质粒浓度较高，可以适当减少洗脱体积，但是需注意体积过小降低质粒洗脱效率，减少质粒产量（最小不应少于1mL）。
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