- ￥380 - 3800
- 百奥莱博
- RFT028-DPY
- 北京
- 2025年07月09日
企业认证
相关产品推荐更多 >
万千商家帮你免费找货
0 人在求购买到急需产品
- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
444
- 英文名：
High purity Plasmid Extraction Kit
- 保质期：
12个月
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件：
RT
- 规格：
100次|200次
尽管该试剂盒可以抽提较大的质粒（＞10kb），但我们不推荐使用。如果一定要使用，请参考以下方法：加大菌体使用量（使用5～10mL过夜培养物），同时按照比例增加P1、P2、P3的用量；洗脱缓冲液应在70℃预热，在吸附和洗脱时可以适当的延长时间，以增加提取效率，其它步骤相同。
本试剂盒使用了Lysis Dye，菌体裂解是否完全一目了然。由于判断菌体裂解和中和是否彻底更主要取决于操作者的经验，所以我们增加了Lysis Dye（一种能使裂解/中和体系变换颜色的试剂）来帮助观察裂解/中和的程度。加入P1后，Lysis Dye使菌液变为浑浊的红色；加入P2后，Lysis Dye立即使溶液变为澄清的红色，裂解是否完全只要观察红色溶液是否澄清，如果红色非常均一，表明裂解充分；在完全裂解的体系中加入P3混匀后，体系立即变为黄色，任何红色的残留表明没有完全混匀或者中和不彻底。
本试剂盒增加了去蛋白液PD，能更加彻底地去除蛋白污染，得到纯度更高的质粒。
试剂盒组成：
| 组分 | 100次 | 200次 | 保存 |
| RNase A | 300μL | 600μL | -20℃ |
| Lysis Dye | 600μL | 2×600μL | 室温 |
| 溶液P1 | 30mL | 60mL | 室温 |
| 溶液P2 | 30mL | 60mL | 室温 |
| 溶液P3 | 40mL | 80mL | 室温 |
| 去蛋白液PD | 60mL | 120mL | 室温 |
| 漂洗液PW | 25mL | 2×25mL | 室温 |
| 洗脱缓冲液EB | 15mL | 15mL | 室温 |
| 吸附柱CP及收集管 | 100套 | 200套 | 室温 |
保存：室温（25℃左右）干燥条件下，可保存1年；更长时间的保存可置于2～8℃。2～8℃保存条件下，若溶液产生沉淀，应在使用前置于37℃下溶解沉淀至溶液澄清后再使用。单独包装的RNase A在-20℃可稳定保存1年以上。加入RNase A后的溶液P1应置于2～8℃保存，可稳定保存半年。
准备工作：
- 将试剂盒附带的RNase A全部加入到溶液P1中（如15mL P1中加入150μL RNase A），混匀后4℃贮存。
- 按照标签所示在漂洗液PW中加入无水乙醇，混匀后盖紧瓶盖后室温贮存备用。
- 每次使用前请检查溶液P2，溶液P3和去蛋白液PD是否有沉淀生成，如果出现沉淀，37℃温浴至沉淀溶解后再使用。
使用方法：
一、使用Lysis Dye的标准操作步骤
如非指出，所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
- 取1～5mL过夜培养的菌液加入离心管中，10000g离心1分钟，尽量吸除上清。
注：菌液较多时可以通过几次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中。 - 向菌体沉淀的离心管中加入250μL溶液P1（请先检查是否已加入RNaseA）和5μL Lysis Dye，使用移液器或涡旋振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀，此时溶液为浑浊的红色。
注：如果有未彻底混匀的菌块，会影响裂解，导致提取量和纯度偏低。 - 加入250μL溶液P2，温和地上下翻转6～8次使菌体充分裂解，此时溶液变为澄清的红色。
注：温和地混合，不要剧烈震荡，以免污染基因组DNA；所用时间绝对不应超过5分钟，以免质粒受到破坏；红色溶液应该透明均一，如有浑浊红色颗粒，表明裂解不充分，会大大降低质粒提取效率。 - 加入350μL溶液P3，立即温和地上下翻转，充分混匀，混匀充分的标志是溶液完全呈透明的黄色，如有可见红色，说明混匀不彻底。10000g离心10分钟。
注：P3加入后应立即混合，避免产生局部沉淀。 - 小心地将上清转移到吸附柱CP中（吸附柱放入收集管中），10000g离心30～60秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP重新放回收集管中。
- 向吸附柱CP中加入500μL去蛋白液PD，10000g离心30秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP重新放回收集管中。
- 向吸附柱CP中加入700μL漂洗液PW（请先检查是否已加入无水乙醇），10000g离心30～60秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP重新放回收集管中。
- 向吸附柱CP中加入500μL漂洗液PW，10000g离心30～60秒，倒掉收集管中的废液。
- 将吸附柱CP置于重新放回收集管中，10000g离心2分钟。
注：此步骤目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，绝对不可省略，因为漂洗液中乙醇的残留会影响后续实验（酶切，PCR等）。 - 将吸附柱CP置于一个干净的1.5mL离心管中，向吸附膜的中央部位悬空滴加50～100μL洗脱缓冲液EB，室温放置2分钟，10000g离心2分钟将质粒溶液收集到离心管中，-20℃保存。
注：
● 为了增加质粒的回收效率，可将得到的洗脱液重新加入离心吸附柱中，再次离心收集。
● 洗脱缓冲液体积不应少于50μL，体积过小影响回收效率。
● 洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0～8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率。
二、不使用Lysis Dye的标准操作步骤
如非指出，所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
- 取1～5mL过夜培养的菌液加入离心管中，10000g离心1分钟，尽量吸除上清。
注：菌液较多时可以通过几次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中。 - 向菌体沉淀的离心管中加入250μL溶液P1（请先检查是否已加入RNaseA），使用移液器或涡旋振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。
注：如果有未彻底混匀的菌块，会影响裂解，导致提取量和纯度偏低。 - 加入250μL溶液P2，温和地上下翻转6～8次使菌体充分裂解。
注：温和地混合，不要剧烈震荡，以免污染基因组DNA；所用时间绝对不应超过5分钟，以免质粒受到破坏。 - 加入350μL溶液P3，立即温和地上下翻转6～8次，充分混匀，此时会出现白色絮状沉淀。10000g离心10分钟。
注：P3加入后应立即混合，避免产生局部沉淀。如果上清中还有微小白色沉淀，可再次离心后取上清。 - 小心地将上清转移到吸附柱CP中（吸附柱放入收集管中），10000g离心30～60秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP重新放回收集管中。
- 向吸附柱CP中加入500μL去蛋白液PD，10000g离心30秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP重新放回收集管中。
- 向吸附柱CP中加入700μL漂洗液PW（请先检查是否已加入无水乙醇），10000g离心30～60秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP重新放回收集管中。
- 向吸附柱CP中加入500μL漂洗液PW，10000g离心30～60秒，倒掉收集管中的废液。
- 将吸附柱CP置于收集管中，10000g离心2分钟。
注：此步骤目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，绝对不可省略，因为漂洗液中乙醇的残留会影响后续实验（酶切，PCR等）。 - 将吸附柱CP置于一个干净的1.5mL离心管中，向吸附膜的中央部位悬空滴加50～100μL洗脱缓冲液EB，室温放置2分钟，10000g离心2分钟将质粒溶液收集到离心管中，-20℃保存。
注：
● 为了增加质粒的回收效率，可将得到的洗脱液重新加入离心吸附柱中，再次离心收集。
● 洗脱缓冲液体积不应少于50μL，体积过小影响回收效率。
● 洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0～8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率。
风险提示：丁香通仅作为第三方平台，为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全，合理判断，谨慎选购商品，商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品，请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
文献和实验血液基因组 DNA 提取试剂盒操作指南（DP349） ——中量全血操作流程（1-5 ml血样）
以下操作按照天根产品 DP349 血液基因组 DNA 提取试剂盒的说明书进行，所有反应现象仅适用于该产品及本文所标明的样本量。如使用其它操作流程或产品，样本量不同可能现象与本文有所差异。实验准备：1. 抗凝全血(本实验以5 ml人的抗凝全血为例 )2. 移液器及配套无菌枪头（2.5 μl，10 μl ，200 μl ，1ml），15 ml离心管3. 无水乙醇，70%乙醇，干净的吸水纸4. 涡旋振荡器，金属浴/水浴，台式离心机本文版权归天根生化科技（北京）有限公司所有,仅供个人学习使用,请勿转载
以下操作按照天根产品 DP433 血液总 RNA 提取试剂盒的说明书进行，所有反应现象仅适用于该产品及本文所标明的样本量。如使用其它操作流程或产品，样本量不同可能现象与本文有所差异。实验准备：1. 新鲜血液样品（ 200 μl ）2. 无水乙醇，β-巯基乙醇3. 一次性无菌注射器（DNase I配置），移液器及配套RNase-Free无菌枪头（200 μl ，1ml） 1.5 ml，2.0ml 离心管（RNase-free）4. 通风橱 涡旋振荡器 金属浴 台式低温离心机本文版权归天根生化科技
以下操作按照天根产品 DP432 植物总 RNA 提取试剂盒的说明书进行，所有反应现象仅适用于该产品及本文所标明的样本量。如使用其它操作流程或产品，样本量不同可能现象与本文有所差异。实验准备：1. 植物样品（10-20 mg），研钵，液氮2. 无水乙醇，β-巯基乙醇3. 一次性无菌注射器（DNase I配置），移液器及配套RNase-Free无菌枪头（200 μl ，1ml） 1.5 ml，2.0ml 离心管（RNase-free）4. 通风橱 涡旋振荡器 金属浴 台式低温离心机本文版权归天
技术资料暂无技术资料 索取技术资料
