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- 详细信息
- 文献和实验
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23
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详见说明书
- 供应商:
上海一研
- 保存条件:
低温
- 规格:
500T
英文名称:
产品规格:500T
发货周期:1~3天
荧光染料PKH67 是一种可对活细胞进行荧光标记的新型染料,可以标记活体细胞,通过与膜结构的脂质分子结合而标记细胞。
PKH67对细胞毒性较小,荧光背景低,脂溶性高,能够轻易穿透细胞膜,有着强而稳定的绿色荧光。经PKH67标记的细胞可用于体外和体内增殖研究,且具有不会使邻近细胞染色的功能。
在细胞分裂增殖过程中,PKH67 的荧光强度会随着细胞的分裂而逐级递减,标记荧光可平均分配至两个子代细胞中,因此其荧光强度是亲代细胞的一半,根据这一特性,它可被用于检测细胞增殖,细胞周期的估算及细胞分裂等方面。PKH67标记细胞的荧光非常均一,并且分裂后的子代细胞的荧光分配也更均一。在细胞分裂增殖过程中,PKH67标记荧光可平均分配至两个子代细胞中,荧光强度变为亲代细胞的一半,通过流式细胞仪根据荧光强度的不同,可检测出未分裂细胞,分裂一次(1/2 的荧光强度),二次(1/4 的荧光强度),三次(1/8 的荧光强度),以及更多分裂次数的细胞。PKH67 可检测分裂次数多达六次甚至更多。
除了用于细胞增殖检测,PKH67 还可以用于细胞的体外盒体内示踪,标记后荧光在胞内表达稳定,阳性标记率达98%以上,标记细胞形态良好,能有效地观察细胞在体外的诱导分化情况;或将标记的细胞注入体内,可以有效的显示移植细胞在活体组织中的迁移及分化。
PKH67标记的细胞用于体内观察可以长达数周之久,它常被用来做活体细胞检测实验和用荧光电镜观察细胞长期活动的实验。PKH67 毒性较小,不影响细胞的增殖能力。此方法操作简单,且不用放射性同位素,不存在安全隐患。可以更快速,更准确和更安全地得到想要的实验数据。
PKH67标记细胞后通常用流式细胞仪进行细胞增殖检测。
PKH67标记细胞呈绿色荧光,荧光波长:λex=490 nm,λem=502 nm。
储存条件:-20℃避光保存。
细胞膜染色试剂盒(PKH67)使用注意事项
1. 微量试剂取用前请离心集液。
2. Annexin V-EGFP,Propidium Iodide(PI)避光保存及使用。
3. Propidium Iodide (PI)有毒,操作时请戴手套。
4. 本试剂盒适用于检测活细胞,流式细胞仪检测时,细胞数量不应低于1×105,,不推荐用于检测组织样本。
5. 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞,需用不含EDTA的胰酶消化,如消化不当,可能引起假阳性,而用细胞刮子会造成细胞粘连成团,而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA的PBS中,防止进一步的损伤。
6. 细胞固定后可能导致荧光的淬灭,请不要固定样品。
7. 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同,因而流式检测的荧光补偿也不同,因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照,进行荧光补偿的调节。
使用说明
1. 细胞的增殖和细胞毒实验,一般可在96孔细胞培养板中进行。
2. 每孔加入100微升细胞悬液。细胞的数量取决于实验目的和培养时间。增殖实验每孔通常加入103个以上数量的细胞;细胞毒性实验每孔至少加入5x103个或以上数量的细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等因素确定)。
3. 接种的细胞按照实验需要,送入细胞培养箱进行培养。增殖实验通常要给予0-10微升特定的药物或生长因子进行刺激。细胞毒实验通常要给予0-10微升抑制因子或细胞毒药物;
4.培养结束后,每孔加入20微升MTT溶液,在细胞培养箱内继续孵育3-6小时;
5.孵育结束后,每孔加入100微升Formanzan溶解液,在37℃细胞培养箱内再继续孵育,直至在镜下观察formazan全部溶解。通常37℃孵育4小时左右,紫色结晶会全部溶解。如果紫色结晶较小较少,溶解的时间会短一些。如果紫色结晶较大较多,溶解的时间会略长。
6. 在570nm测定吸光度。如无570nm滤光片, 560-600nm范围的滤光片均可使用。
肾小球细胞粘附分子受体抗体英文全称follicle-stimulating hormone antibody英文简称FSH Ab检测范围6910nmol/L-200ng/ml
硝基化α-突触核蛋白英文全称Pregnant Mare Serum Gonadotropin antibody英文简称PMSG Ab检测范围6911nmol/L-160ng/ml
EGR1结合蛋白2抗体英文全称Lyme disease英文简称LD检测范围6912nmol/L-
NK2转录样蛋白B抗体英文全称brucellosis antibody英文简称brucellosis-Ab检测范围6913nmol/L-
丝氨酸或半胱氨酸蛋白水解酶抑制蛋白1抗体英文全称Fibrous xylanase英文简称Fx检测范围6914nmol/L-800U/L
跨膜酸软骨素蛋白聚糖C抗体英文全称Parathyroid Hormone英文简称PTH检测范围6915nmol/L-800pg/mL
神经肿瘤Nova1抗原抗体英文全称stearoyl-coenzyme A desaturase英文简称SCD检测范围6916nmol/L-1000pg/mL
酸软骨素蛋白多糖4/黑色素瘤相关蛋白抗体英文全称Pyruvate dehydrogenase kinase4英文简称PDK4检测范围6917nmol/L-10ng/mL
突触细胞粘附分子3抗体英文全称Calcifediol英文简称Calcifediol检测范围6918nmol/L-800pg/ml
黑色素瘤酸软骨素蛋白多糖4抗体英文全称Calcitrio英文简称Calcitrio检测范围6919nmol/L-640pg/ml
NDST1蛋白抗体英文全称Estradio-17β英文简称Estradio-17β检测范围6920nmol/L-1000pg/ml
神经元素1抗体英文全称Lactoferricin英文简称Lfcin检测范围6921nmol/L-8ug/ml
指(趾)关节粘连NOG蛋白抗体英文全称25(OH)D2英文简称25(OH)D2检测范围6922nmol/L-80ng/ml
心脏特异性同源盒转录因子NKX2.5抗体英文全称1,25-dihydroxyvitamin D英文简称1,25(OH)2D检测范围6923nmol/L-200ng/mL
核小体结合蛋白1抗体英文全称Chlamydia英文简称Chlamydia检测范围6924nmol/L-
蓝胶琼脂糖CNGA4 rabbit polyclonal antibody反应物种:Human, Mouse, Rat测试范围:ELISA, WB, IHC包装:100 ul
蓝胶琼脂糖SCD rabbit polyclonal antibody反应物种:Human测试范围:ELISA, IHC包装:100 ul
DEAE交换介质SAMD9 rabbit polyclonal antibody反应物种:Human测试范围:ELISA, IHC包装:100 ul
Q交换介质MMP2 rabbit polyclonal antibody反应物种:Human, Mouse, Rat测试范围:ELISA, IHC包装:100 ul
CM交换介质ABHD14B rabbit polyclonal antibody反应物种:Human, Mouse, Rat测试范围:ELISA, WB, IHC包装:100 ul
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文献和实验到大量纳米颗粒,可能是胶束和聚集体,颗粒分布在80-400 nm,与外泌体所在的粒径区间(30-150 nm)存在交集,这与之前报告的结果一致[2, 3]。PKH聚集而成的纳米颗粒自身的荧光干扰不容忽视,Lai 等人[4]研究表明用 PKH67 染色(没有 EV)甚至比 PKH67 染色的 EV 具有更强的荧光信号,这些同样具有荧光的纳米颗粒会“伪装”成外泌体,影响标记阳性率、外泌体粒径分布和细胞摄取结果。 Fig.1 NTA视频观察到大量聚集的PKH颗粒 2. 弥散造成的假阳
PKH染料,如PKH67和PKH26,是高荧光、亲脂性的长链羰花青染料,目前被应用于细胞外囊泡(EVs)及其功能的研究,有研究评估了PKH在研究EV摄取时的适用性,发现PKH标记会显著影响外泌体细胞摄取结果的真实性,引入假阳性结果[1]。 不同纯化方法去除PKH 已有共识的是,PKH标记EV会引入PKH颗粒杂质,Lai等人[2]首先发现非EV的PKH阳性结构的存在,他们表明用仅PKH67对照组比PKH67染色的EV样品具有更大的荧光信号。在上篇文章中,我们论证
baibai17 今天开题,导师问了个问题:ki67为什么叫ki67?当场傻住······恳请各位老师指教!谢谢。 keavin521 The Ki-67 protein was originally defined by the prototype monoclonal antibody Ki-67 (Gerdes et al., 1983),which was generated by immunizing mice
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