- ￥380 - 3800
- 百奥莱博
- WE0162-SUB
- 北京
- 2025年07月13日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
242
- 英文名：
PlaPure Mini Extraction Kit
- 保质期：
长期
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件：
RT(15～30℃)
- 规格：
50次|200次
试剂盒组成：
| 组份 | 200次 |
| Buffer P1 | 60mL |
| Buffer P2 | 60mL |
| Buffer N3 | 80mL |
| Buffer PB | 35mL |
| Buffer PW(浓缩液) | 25mL |
| Buffer EB | 30mL |
| RNase A(10mg/ml) | 600μL |
| 吸附柱DM及收集管 | 200套 |
储存条件：室温(15～30℃)。
自备试剂：无水乙醇。
实验前准备及重要注意事项：
- 所有组分可在干燥、室温（15～30℃）环境稳定保存1年，将吸附柱置于2～8℃可保存更长时间，加入RNase A的Buffer P1置于2～8℃可稳定保存6个月。
- 第一次使用前，将RNase A溶液全部加入到Buffer P1中，混匀，置于2～8℃保存，使用前需在室温中放置一段时间，恢复至室温后使用。
- 第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer PW中加入无水乙醇。
- 使用前若发现Buffer P2、Buffer N3、Buffer PB有沉淀，可在37℃水浴几分钟，即可恢复澄清（请勿剧烈晃动Buffer P2）。
- 注意不要直接接触Buffer P2、Buffer N3和Buffer PB，使用后应立即盖紧盖子。
- 提取质粒的量和纯度与细菌培养浓度、菌株种类、质粒大小、质粒拷贝数等因素有关。
操作步骤：
- 取1～5mL过夜培养的菌液加入离心管（自备）中，13000rpm（~16200×g）离心30秒收集菌体沉淀，尽量吸弃上清。
- 向留有菌体沉淀的离心管中加入250μL Buffer P1（请先检查是否已加入RNase A），使用移液器或涡旋振荡器充分混匀，悬浮菌体沉淀。
注意：如果菌块未彻底混匀，将会影响裂解效果，导致提取量和纯度偏低。 - 向离心管中加入250μL Buffer P2，温和地上下颠倒混匀4～6次，充分混匀使菌体裂解，此时溶液应变得清亮粘稠。
注意：温和混匀，不要剧烈震荡，以免打断基因组DNA，造成提取的质粒中混有基因组DNA片段。
此步骤所用时间应不超过5分钟，避免质粒受到破坏。 - 向离心管中加入350μL Buffer N3，立即温和地上下颠倒混匀8～10次，充分混匀，此时应出现白色絮状沉淀。13000rpm离心5分钟。
注意：Buffer N3加入后应立即混匀，避免产生局部沉淀。 - 将步骤4中所得的上清液转移到已装入收集管的吸附柱DM中，13000rpm离心30秒钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
- 向吸附柱中加入150μL Buffer PB，13000rpm离心30秒。
- 向吸附柱中加入400μL Buffer PW（请先检查是否已加入无水乙醇），13000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液。
- 将吸附柱置于一个新的离心管（自备）中，向吸附膜的中间部位加入50～100μL Buffer EB，室温放置2分钟，13000rpm离心1分钟，将质粒溶液收集到离心管中。-20℃保存质粒。
注意：
1）为了增加质粒的回收效率，可将得到的溶液重新加入到吸附柱中，室温放置2分钟，13000rpm离心1分钟，将质粒溶液收集到离心管中。
2）质粒拷贝数较低或＞10kb时，Buffer EB在65～70℃水浴预热，可以增加提取效率。
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