- ￥1880 - 2880
- 百奥莱博
- JN0130-TEF
- 北京
- 2025年07月12日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
224
- 保质期：
12个月
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件：
RT
- 规格：
50次
试剂盒组成：
| 组份 | 体积 |
| 溶液P1（Buffer P1) | 15mL |
| 溶液P2（Buffer P2) | 15mL |
| 溶液P3（Buffer P3) | 20mL |
| 去蛋白液PE（Buffer PE) | 30mL |
| 漂洗液PW(Buffer PW) | 12mL |
| 洗脱缓冲液EB（Buffer EB) | 10mL |
| RNase A(20mg/mL) | 1.5mg（75μL） |
| 吸附柱及收集管 | 50套 |
保存条件：
室温条件下，可保存12个月，更长时间保存可置于4℃。若溶液产生沉淀，可在室温下放置一段时间，或在37℃水浴中预热10min，以溶解沉淀。
使用建议：
如果所提质粒为低拷贝质粒或大10kb的大质粒，应加大菌体使用量，使用5～10mL过夜培养物，同时按照比例增加P1、P2、P3的用量，洗脱缓冲液EB应在65～70℃水浴预热，在吸附和洗脱时可以适当的延长时间，以增加提取效率。其它步骤相同。
注意事项：
- 溶液P1（Buffer P1)在使用前先加入RNase A（全部加入），混匀，4℃保存。
- 漂洗液PW（Buffer PW)使用前应加入48mL无水乙醇。
- 溶液P2（Buffer P2)低于室温会产生沉淀，使用前应检查是否出现浑浊，如有浑浊现象，50℃水浴加热溶解。溶液P2（Buffer P2)使用后请拧紧瓶盖。
- 溶液P2和P3对人体有刺激性，操作时请小心，不要直接接触。
- 提取的质粒量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。
- 去蛋白液PE可以有效去除残留的蛋白污染，当宿主菌为endA+ （TG1、BL21、HB101、ET12567、JM系列）等核酸酶含量较高的菌株时，强烈推荐使用去蛋白液PE。
操作步骤：
漂洗液PW在使用前按照试剂瓶所示体积加入无水乙醇，混合均匀。
- 取1～4mL过夜培养的菌液，加入离心管中，室温下10000rpm离心1min，收集菌体，并尽可能地吸尽上清。
- 向留有菌体沉淀的离心管中加入250μL溶液P1（Buffer P1) （请先检查是否已加入RNase A），使用移液器或涡旋振荡器彻底悬浮细菌沉淀。
- 向离心管中加入250μL溶液P2（Buffer P2)，轻轻颠倒离心管10次以混合均匀，然后静置5min至溶液粘稠而澄清。
注意：不要剧烈震荡，以免造成所提质粒中基因组DNA污染。此时菌液应变得清亮粘稠，所用时间不应超过5min，以免质粒受到破坏。如果溶液未变得清亮，可能菌体量过多，裂解不彻底，应减少菌体量。向离心管中加入250μL溶液P2，轻轻颠倒离心管混匀6～8次，使菌体充分裂解。 - 向离心管中加入350μL溶液P3（Buffer P3)，立即上下颠倒混匀6～8次，此时出现白色絮状沉淀。室温下13000rpm离心10min。
注意：P3加入后应立即混合，避免产生局部沉淀。 - 小心吸取上清液转移到带有收集管的吸附柱中，室温下13000rpm离心1min，移除收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。
注意：洗脱缓冲液体积不应少于50μL，体积过小影响回收效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若后续做测序，需使用ddH2O做洗脱液，并保证其pH值在7.0～8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率。且DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。为了增加质粒的回收率，可将得到的溶液重新加入吸附柱中，再次离心收集。 - 向吸附柱中加入500μL溶液PE（Buffer PE)，室温下13000rpm离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管。
注：溶液PE（Buffer PE)可以有效去除残留的蛋白污染，当宿主菌为endA+ （TG1、BL21、HB101、ET12567、JM系列）等核酸酶含量较高的菌株时，强烈推荐使用Buffer PE。 - 向吸附柱中加入500μL溶液PW（Buffer PW)（请先检查是否已加入无水乙醇），室温下13000rpm离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。
- 重复操作步骤7。
- 将吸附柱放入收集管中，打开盖子，室温下13000rpm离心5～10min，目的是将吸附柱中残留的乙醇去除。
注意：漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR等）实验，建议将吸附柱CM开盖，置于室温放置数分钟。
将吸附柱转移至一个的1.5mL离心管中，向吸附膜的中间部位滴加50～100μL洗脱液EB（Buffer EB)或ddH2O，室温放置2min，13000rpm离心1min，收集洗脱液。
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