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- 百奥莱博
- YT069-EQZ
- 北京
- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
51
- 英文名：
Western Wash Buffer(10X)
- 保质期：
1-2周
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件：
4℃
- 规格：
100ml|10×100ml
注意事项：本Western洗涤液(10X)配制成Western洗涤液(1X)后，宜4℃保存，并在1-2个月内用完。如果室温保存，宜在1-2周内用完。
储存条件：4℃，有效期一年。
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文献和实验免疫印迹(Western blot)简介和原理 免疫印迹用于鉴定能够与特异性抗体相互作用的大分子抗原（一般为蛋白质）并测定抗原的大小。蛋白质首先通过 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，再通过电泳转移到固相支持物上，固相支持物包括硝酸纤维素膜，聚偏乙烯二氟（PVDF）膜和阳离子尼龙膜等。首先把膜上未反应的位点封闭起来以抑制抗体的非特异性吸附，这样固定的蛋白即可与特异性的多克隆或单克隆抗体相互作用。最后通过放射，生色或化学发光的方法进行定位。 实验常规试剂 1.0 mol/L Tris•HCl
。也可以用考马斯亮蓝快速染色液对完成转膜的SDS-PAGE胶进行染色，以观察蛋白的残留情况。 4. 封闭(Blocking)： 转膜完毕后，立即把蛋白膜放置到预先准备好的Western洗涤液中，漂洗1-2分钟，以洗去膜上的转膜液。吸尽洗涤液，加入Western封闭液，在摇床上缓慢摇动,室温封闭60分钟。 从转膜完毕后所有的步骤，一定要注意膜的保湿，避免膜的干燥，否则极易产生较高的背景。 对于一些背景较高的抗体，可以4℃封闭过夜。 5. 一抗
做了两个月的时间的 western blotting 终于出了比较好的结果。 老板让整理出protocol 这是写的PROTOCOL 大概会有很多错误请大家指正！谢谢先 WESTERN PROTOCOL A. Preparation of Samples 1. Get the heads of the fly 2. Stir them in the lysis buffer(4heads/10ul) 3. Add 2XSDS-gel-loading buffer
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