脱钙液(EDTA型）

三生三世，一场组化，一次豪赌

1. 标本固定——不仅仅是「切一切」和「泡一泡」温柔地取材：大刀阔斧取材的同时，视组织如珍宝，莫挤压组织，轻柔取材和镊取。尽量避开坏死区域。太大太厚的组织不利于均匀一致的固定，实质组织取材厚度应小于 5 mm。新鲜的固定液： 固定液 10% 中性缓冲福尔马林 (NBF) 需新鲜配置，商用型固定液注意其标注的有效期，避免使用过期变质的固定液。充分及时地固定：固定液要充足，其与组织的体积比最好大于等于 20 倍；取材后即刻固定。固定时需将瓶口封住，避免甲醛挥发。组织的固定时间不宜过长，一般过夜（12～24

免疫组化技术规范

组化染色常不能到达理想结果或不成功。组织同样不能长时间放置在70%的乙醇中，酒精固定后的组织形态不如福尔马林固定的组织。脱钙液对抗原破坏较为严重，因此在组织脱钙前最好在福尔马林液中固定48小时，若组织没有固定透则酸会破坏抗原，脱钙液中酸的浓度与脱钙时间都必须尽量控制在最低的限度。3、浸蜡：我们认为浸蜡温度应控制在58~60℃左右，浸蜡用的石蜡应经常更换，以减少石蜡中二甲苯的含量。高温下的二甲苯容易使组织发脆，细胞收缩，更容易掉片。4、切片厚度：用于免疫组织化学染色的切片厚度为3-4微米。为防止在染色过程

类器官培养与应用——肾类器官

1 培养基换液，细胞将重新聚合成EB。 6、培养 24h 后，将 EB 转移到 U 型底低吸附的 96 孔板中，加入 Step2 培养基，培养 36h。 7、将细胞用 Step3 培养基换液，培养 48h。 8、将细胞用 Step4 培养基换液，培养 42h。 中肾管（Wolffian duct, WD）前体细胞成熟 9、将上清吸出，加入 0.25% 胰酶/EDTA 至没过细胞，37℃ 消化 6min 解离细胞球。 10、血清封闭后，加入含有 CXCR4/KIT 抗体的稀释液（含 1×HBSS