293FT表达SV40T抗原人胚肾上皮细胞

细胞名称：        293FT表达SV40T抗原人胚肾上皮细胞

种属来源:          人

组织来源:          胚肾

疾病特征:          正常

细胞形态:          圆形

生长特性:          贴壁生长

应     用：              293FT细胞主要用于慢病毒包装，是目前使用广泛和效果zui的慢病毒包装细胞。

培  养 基:              293FT细胞的1L完整培养基配方如下：

DMEM培养基                                      900ml
胎牛血清                                          100ml
10mMMEM-NEAA（Non-EssentialAminoAcids，100X）    10ml
200mML-Glutamine（100x）                         10ml
100mMMEMbing酮酸钠（100X）                      10ml
青链霉素双抗（100x）                              10ml
50mg/ml遗传霉素G418（100x）                     10ml

配置的完全培养基zui现配现用，没有用完的可以放置在4度冰箱中，保存时间可以达到半年！

生长条件:    气相：空气，95%；二氧化碳，5-10%;温度：37℃,

传代方法:    1：2至1：6，每周2次。

冻存条件:    90%完全培养基+10%DMSO，液氮储存

支原体检测:    阴性

产品说明：
1、293FT细胞主要用于慢病毒包装系统，是目前zui的慢病毒包装细胞株。

2、293FT细胞来源于293F细胞，稳表达SV40largeT抗原。细胞中SV40largeT抗原表达启动子是CMV启动子，蛋白表达水平较高而且持续稳定。这使得293FT细胞成为非常适合于慢病毒包装的宿主细胞。

3、293FT细胞具有新霉素抗性，该抗性来自细胞中含有的SV40largeT稳表达质粒（pCMVSPORT6TAg.neo）。该新霉素基因位于SV40启动子的控制下，因此，在传代293FT细胞的时候，需要使用遗传霉素（也叫新霉素或者G418，工作浓度为500ug/ml）进行抗性筛选传代。

4、293FT慢病毒包装细胞的完全培养基中，需要包含500ug/ml的遗传霉素，用于细胞的筛选维持。遗传霉素（G418）的储存浓度是50mg/ml,是工作浓度的100倍。

5、慢病毒包装质粒转染的时候，需要保证细胞已经复苏24-48小时，同时需要保证293FT细胞的活力大于90%。

6、293FT细胞是贴壁细胞，传代的时候，需要进行胰酶消化。

7、DMEM培养基中本身就含有4mM的L-Glutamine，但是因为L-Glutamine会随着时间降解，所以在完全培养基中，建议补加2mM的谷氨酰胺。6mM浓度的谷氨酰胺，能够更维持293FT细胞的生长，更的包装慢病毒。

293FT表达SV40T抗原人胚肾上皮细胞接受后处理
1)收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。

2)请先在显微镜下确认细胞生长状态，去掉封口膜并将T25瓶置于37℃培养约2-3h。

3)弃去T25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的完全培养基。

4)如果细胞密度达80%-90%请及时进行细胞传代，传代培养用6ml本公司附带的完全培养基。

5)接到细胞次日，请检查细胞是否污染，若发现污染或疑似污染，请及时与我们取得联系。

培养操作
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2.加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4.将细胞悬液按1：2比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为类；

1.细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗一遍后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入1ml含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。

2.4min1000rpm离心去掉上清。加1ml血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和DMSO，轻轻混匀，DMSO终浓度为10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存1ml细胞悬液，注意冻存管做标识。

3.将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

293FT表达SV40T抗原人胚肾上皮细胞培养注意事项
1.收到细胞后首先观察细胞瓶是否完，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。

2.仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致。若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3.用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落，将细胞置于培养箱内静置培养4~6小时,再取出观察。此时多数细胞均会贴壁，若细胞仍不能贴壁请用台盼蓝染色测定细胞活力，如果证实细胞活力正常，请将细胞离心后用新鲜培养基再次贴壁培养；如果染色结果显示细胞无活力，请拍下照片及时和我们联系，信息确认后我们为您再免费寄送一次。

4.静置细胞贴壁后，请将细胞瓶内的培养基倒出，留6~8mL维持细胞正常培养，待细胞汇合度80%左右时正常传代。

5.请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞传代时可以一定比例和客户自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件。

6.建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，告知细胞的具体情况，以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7.该细胞仅供科研使用。