- ¥680 - 2680
- 沪震生物/HZbscience
- HZ-1020L
- 进口/国产
- 2025年07月10日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
JM109 Chemically Competent Cell
- 保质期：
-80℃（6个月）
- 供应商：
上海沪震实业有限公司
- 保存条件：
-80℃（6个月）
- 规格：
盒
JM109 Chemically Competent Cell 产品说明书
●产品规格
JM109：
pUC19 (control vector，10pg/μl): 10μl
保存条件(保质期)： -80℃（6个月）
●基因型
endA1 recA1 gyrA96 thi-1 hsdR17 (rk-,mk+) relA1 supE44 D (lac-proAB) [F′traD36 proAB laqI qZΔM15]
●产品说明
JM109菌株来源于E.coli K strain，是提取高质量DNA的理想菌株，recA1和endA1的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。携带hsdR17基因型背景，使得异源DNA不被内源核酸酶系统降解。laqI qZΔM15的存在使JM109可用于构建克隆，蓝白斑筛选实验；JM109感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率可达109cfu/μg DNA。
●操作方法
1. JM109感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA (质粒或连接产物) 并用手拨打EP管底轻轻混匀 (避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰中并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。
4. 5000 rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。
●注意事项
1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。
2. 混入质粒或连接产物时应轻柔操作。
3. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。
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文献和实验7 的缓冲液来洗脱；洗脱液提前预热至 65℃ 也可以提高洗脱效率。 3. 提取质粒转化大肠杆菌效率低 大肠杆菌转化效率受到多种因素的影响，例如感受态细胞状态，转化方式及操作（电转或热激），质粒用量，质粒质量等等。从感受态角度优化，可以考虑感受态本身的状态，比如贮存时间、贮存方式不当会导致感受态转化效率明显降低，此外热激条件也会影响感受态转化效率，建议热激时间严格按照感受态类型或说明书操作。从质粒角度优化，可以进一步确认质粒用量，质粒浓度，质粒是否降解等。 4. 提取质粒转染细胞效率低
，42度热激多久为宜？ 问一个问题：买的PROMEGA的载体，随带了JM109细胞，但是不是感受态，为什么 对感受态细菌进行质粒转化方法的选择？ 请问制备感受态细胞的和转化的问题。 在线急问，感受态制备后的CACL2悬浮菌体液为何有沉淀？ 转染后的感受态菌在培养基上不生长会是什么原因？急！ 我的感受态老是不成功，下面是我的工作流程，请看有什么问题？ 感受态细胞的制备如何将第一次离心后的菌体悬浮？ 关于感受态细胞的问题 (求教)关于枯草杆菌感受态及转化！
步骤 实验原理 1 挑取一个JM109单菌落于3ml LB(无抗生素)培养基中，37℃，180rpm培养过夜。 让菌复苏，进入对数期的早中期。此时更容易制得感受态细胞。 2 取0.4mL过夜培养物加入到40mL LB(无抗生素)培养基中，37℃250rpm大约
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