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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 免疫原:
A DNA sequence encoding the human KLRC1 (NP_002250.1) (Arg100- Leu233) was expressed with a polyhistidine tag at the N-terminus.
- 亚型:
见说明书
- 形态:
液体
- 保存条件:
4℃
- 克隆性:
无
- 标记物:
见说明书
- 适应物种:
Human
- 保质期:
12个月
- 抗原来源:
见说明书
- 目录编号:
13905-H07HL
- 级别:
免疫学
- 库存:
99
- 供应商:
北京义翘神州科技股份有限公司
- 宿主:
HEK293 Cells
- 应用范围:
0
- 浓度:
见说明书
- 靶点:
KLRC1
- 抗体英文名:
Human NKG2A / CD159A / KLRC1 HEK293 Cell Lysate (WB positive control)
- 抗体名:
Human NKG2A / CD159A / KLRC1 HEK293 Cell Lysate (WB positive control)
- 规格:
300 µg
反应种属:Human
裂解液靶点:KLRC1
裂解液应用:WB
裂解液保存条件:Store at 4℃. After re-dissolution, aliquot and store at -80℃.
裂解液产品描述:Human Cells that Human NKG2A / CD159A / KLRC1 Heterodimer transfected / overexpressed for Western blot (WB) positive control. The whole cell lysate is provided in 1X Sample Buffer (1X modified RIPA buffer+1X SDS loading buffer).
裂解液表达宿主:HEK293 Cells
裂解液制备方法:Cell lysate was prepared by homogenization of the over-expressed cells in ice-cold modified RIPA Lysis Buffer with cocktail of protease inhibitors (Sigma). Cell debris was removed by centrifugation. Protein concentration was determined by Bradford assay (Bio-Rad protein assay, Microplate Standard assay). The cell lysate was boiled for 5 min in 1 x SDS loading buffer (50 mM Tris-HCl pH 6.8, 12.5% glycerol, 1% sodium dodecylsulfate, 0.01% bromophenol blue) containing 5% b-mercaptoethanol, and lyophilized.
裂解液Buffer:Modified RIPA Lysis Buffer: 50 mM Tris-HCl pH 7.4, 150 mM NaCl, 1mM EDTA, 1% Triton X-100, 0.1% SDS, 1% Sodium deoxycholate, 1mM PMSF.
裂解液质控信息:12.5% SDS-PAGE Stained with Coomassie Blue after protein purification.
裂解液使用建议:1. Centrifuge the tube for a few seconds and ensure the pellet at the bottom of the tube. 2. Re-dissolve the pellet using 200μL pure water and boil for 2-5 min.
裂解液稳定性:Samples are stable for up to twelve months from date of receipt.
裂解液使用说明:Western blot (WB): Use at an assay dependent dilution. Other Applications: Not tested. Optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user.
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文献和实验Western Blot实验可以说是生物专业最基础的实验了,然而,虽然WB实验天天做,但是正常高清的结果图并不是你想有就能有。 WB 实验出现最多问题的,应该就是各种背景问题了。 你想一下,好不容易实验过五关斩六将做到最后一步,扫描结果出了,是这样的: 为什么明明跑出了想要的趋势,但就是背景脏?怎么让自己的条带不因脏脏的背景而毁了呢? 这里要清楚一点,背景脏不一定是因为仪器不干净造成的,也有可能是蛋白降解或者整个实验过程中条件不合适造成的,有可能是以下的环节出了问题
文献了解是否可以有条件的诱导目的蛋白的表达,以助于 WB 实验的检测。例如,XPC 蛋白主要表达于细胞核上,在 U87 细胞中表达量远低于 Hela 细胞(抗体说明中的阳性对照),查阅文献后得知 TMZ 诱导可以显著促进 XPC 入核[6]。因此,可以使用 TMZ 诱导 2 周后再开展后续实验。 图 2. XPC 在不同细胞中表达情况 (图片来源:The human protein atlas) 四、小结 除去抗体及操作失误等因素,当出现
收集目标蛋白以下信息: 1. 目标蛋白的名字 2. 目标蛋白在哪些组织中表达,是否具有特异性 3. 目标蛋白的分子量 4. 目标蛋白在细胞中的表达位置及表达量 5. 是否有相应的抗体 如何获取这些信息呢?除查询文献外我们可以借助生物信息学方法及一些产品信息获取相关信息。例如使用 Uniport,维基百科,NCBI,ExPASy 等进行查询。还可以通过相应抗体产品提供的信息进行查询。 了解了目标蛋白以上内容后,我们就可以开始做 WB 设计啦! 二、WB 方案
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