- ￥1770
- Sino Biological
- 北京
- MG52224-NH
- 2025年08月12日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃ to -80℃
- 保质期：
3个月
- 英文名：
Mouse KCNIP4 Gene ORF cDNA clone expression plasmid, N-His tag
- 库存：
99
- 供应商：
北京义翘神州科技股份有限公司
- 规格：
1 Unit
基因靶点：KCNIP4
反应种属：Mouse
应用说明：Stable or Transient mammalian expression
cDNA描述：Full length Clone DNA of Mouse Kv channel interacting protein 4 with N terminal His tag.
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文献和实验）从倍增基因获得，也可以来自人工合成的基因。通过PCR获得感兴趣的DNA的方法是：首先，分离含有感兴趣的DNA片段的mRNA的总RNA，并通过逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）将RNA逆转录成cDNA。根据公布的NCBI基因编码序列（CD）设计寡核苷酸引物，并在引物中加入指定的限制酶位点。然后，通过PCR扩增感兴趣的DNA的编码区，用凝胶提取试剂盒纯化后，将DNA片段插入克隆载体中。通过RT-PCR将RNA逆转录成cDNA通过PCR扩增感兴趣的DNA的编码区经验虽然从RT-PCR中获取DNA片段是常用
以上，这时其ORF超过3000bp，做高保真PCR有难度。注：基金申请中，有时看到申请者人无意识的选做的恰就是大分子量蛋白，可谓不知者者无畏）。 5、但事实上真正的困难还是在于基因的外源表达和功能/活性等后续检测。 所以，建议你先做基因表达检测，然后选择性的再做基因克隆表达。 首先非常感谢这么细致的回复。 我想知道，基因克隆到绿色阳光蛋白载体中，转染细胞后，是否在细胞中看到绿色荧光蛋白就可以认为目的蛋白表达了，还需要进行抗体
要与模板完全结合，而且只能选择orf的两端，所以我们不需要primer5的查找功能。大体有所了解后，就要开始了。 1、选择一个合适的载体，并确定纯化用标签等功能结构放在目的蛋白的N端或C端。 通常以从综述等文献资料里了解目的蛋白的信息为依据，如果实在是难以判断，就凭感觉吧，据说换载体都是经常的事情，sigh。。。 2、考虑是否要引入proteinase切位点 如果真考虑得足够远到成功表达纯化后的那一天，就要考虑把多余的结构切除了，选择proteinase后面的限制性内切酶，越近越好
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