Sino Biological 小鼠NOV基因ORF cDNA克隆表达质粒 C-His标签 质粒表达

四 逆转录PCR (RT-PCR)

可以同与mRNA 3"最末端退火的扩增引物序列相同，或GSP可以设计为与反向扩增引物的下游退火。 已经制备好的双链cDNA和一般DNA一样，可以插入到质粒或噬菌体中，为此，首先必需有适当的接头(Linker)，接头可以是在PCR引物上增加限制性内切酶识别位点片段，经PCR扩增后再克隆入相应的载体；也可以利用末端转移酶在载体和双链cDNA的末端接上一段寡聚dG和dC或dT和dA尾巴,退火后形成重组质粒,并转化到宿主菌中进行扩增。 本实验是要从小鼠肝脏组织中获取Fas配体基因

【共享】Nat methods：解析长链非编码RNA的新技术c-KLAN

尽管当前有多种方法可用于全面研究蛋白质编码基因的细胞内作用，然而用于系统研究与多种生物学信号通路有关的长链非编码RNAs (lncRNAs)的技术却十分有限。在这篇文章中，来自德国德累斯顿工业大学的研究人员开发了一种结合非编码RNAs敲除和定位分析的技术，称之为c-KLAN。利用这一技术对lncRNAs进行了功能鉴定和定位，并鉴别出了调控小鼠胚胎干细胞类型的转录物。在真核生物基因组中大量的蛋白质编码和非编码转录物被转录，然而直到近年来后者才获得广泛的科学关注。LncRNAs是一类非蛋白质编码

盘点 PCR 的七大应用领域

进行标准化，预估扩增靶点的相对表达水平[1,2]。如今，终点 PCR 已基本被实时 PCR 或 qPCR 取代了，因为它们可获得更可靠和更准确的基因表达定量结果。 图 2：起始 cDNA 连续稀释液的 PCR 得率，通过在琼脂糖凝胶上对 PCR 产物染色进行可视化观察。 2.基因分型 PCR 可用于检测特定细胞或生物体中等位基因的序列差异。例如，基因敲除和敲入小鼠等转基因生物的基因分型[3]。引物对经设计位于目标区域侧翼，可根据是否存在扩增子及扩增子长度来检测遗传变异（图 3）。 图 3.PCR 用于