Sino Biological HDGFL1基因ORF cDNA克隆表达质粒 人源哺乳动物稳定/瞬时表达 基因过表达质粒

【求助】差异基因表达的分析方法：哪种比较好？

以上，这时其ORF超过3000bp，做高保真PCR有难度。注：基金申请中，有时看到申请者人无意识的选做的恰就是大分子量蛋白，可谓不知者者无畏）。 5、但事实上真正的困难还是在于基因的外源表达和功能/活性等后续检测。 所以，建议你先做基因表达检测，然后选择性的再做基因克隆表达。 首先非常感谢这么细致的回复。 我想知道，基因克隆到绿色阳光蛋白载体中，转染细胞后，是否在细胞中看到绿色荧光蛋白就可以认为目的蛋白表达了，还需要进行抗体

RNAi技术专题之：体外转录合成双链RNA

siRNA表达载体。构建好的载体可以用于稳定表达siRNA和长效抑制的研究。这个方法的主要缺点是PCR产物很难转染到细胞中。如果有适合的新型转染试剂能提高SEC的转染效率的话，那问题就可以解决了。另外，没有克隆到载体中的PCR片断并不适于大规模制备。Silencer Express siRNA Expression Cassette Kits提供人源和鼠源的U6启动子或者人源H1启动子元件可供选择，并已经过c-fos基因抑制的检验。最适用于：筛选siRNA序列，在克隆到载体前筛选最佳启动子不适用于：长期

基因分离克隆的方法

模cDNA文库测序的序列中确定新基因：首先确定获得的cDNA是否为基因全长cDNA，确定是否有典型的ORF及3’端及5’端。而后可以通过网上搜索确定是否为新的基因，同源比对在判断是否为新基因，若通过检验则为新的基因。10 基因分离克隆的新技术除上述几种基本的方法外，随着生物技术的发展和传统技术的改良，基因可隆的方法又有许多新的技术出现。如基因表达序类标记分析（SAGE）；由DDRT-PCR演变而来的代表性差异分析（RDA），包括基因组DNA（gDNA）的RDA和cDNA的RDA；抑制型差减杂交（SSH