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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20℃ to -80℃
- 保质期:
3个月
- 英文名:
Human KLHL5 Gene ORF cDNA clone expression plasmid
- 库存:
99
- 供应商:
北京义翘神州科技股份有限公司
- 规格:
1 Unit
基因靶点:KLHL5
反应种属:Human
应用说明:Stable or Transient mammalian expression
cDNA描述:Full length Clone DNA of Human kelch-like family member 5
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文献和实验。整个实验操作流程提供长期稳定及规模可调的蛋白生产。与稳定基因表达相比,瞬时表达(TGE)主要适用于短期内制备重组蛋白,普健生物的瞬时表达使用悬浮细胞,能够完成mL到100L的体积的蛋白表达,一般在10天内即可快速转染,无需质粒DNA的遗传性选择。 08转染效率监测 基因的瞬时表达在24-72小时内就结束了。这种快速的瞬时表达非常适用于验证质粒表达和监测转染步骤的效率。 可以使用报告基因来确定优化条件,其表达蛋白易检测,在目的细胞中不含此蛋白或水平很低。常用的报告基因包括氯霉素乙酰转移酶(CAT
。在此报道中我们描述了新的辅助质粒(pH3和pH5),排除了Ad共转染的需求。辅助质粒表达AAV的rep和cap基因和Ad E2A、VAI和E4基因。当辅助质粒在没有Ad感染的情况下共转染到人293细胞中,rAAV载体产量超过了pAAV/Ad包装质粒的80倍。另外,有复制能力的AAV在rAAV制备过程中少于0.00125%。此系统的主要优点是(1)无需感染性的腺病毒(2)只使用两个质粒就提高了转染效率和载体的产出。我们相信该双质粒转染系统因其简便性和高产出而使AAV载体系统能被更广泛地使用。该系统尤其
的。 (3)构建好的载体最好进行测序验证,保证读码框正确,即没有移码。 (4)长期保存的pET重组子在高浓度甘油中会导致质粒不稳定。 (5)37 ℃生长常常会使一些蛋白累积形成包涵体,而30 ℃生长则可能产生可溶的和有活性的蛋白。在某些情况下,低温(15-20℃)延长诱导时间可以使溶解性蛋白的产量达到最大。 (6)进行SDS-PAGE分析时,需优化电泳上样体积。 Q4:毕赤酵母系统具有哪些优点? A4:(1)含有特有的强有力的启动子,这是目前最强、调控机理最严格的启动子之一,用甲醇可严格地调控外源基因
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