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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20℃ to -80℃
- 保质期:
3个月
- 英文名:
Human KCNA10 Gene ORF cDNA clone expression plasmid
- 库存:
99
- 供应商:
北京义翘神州科技股份有限公司
- 规格:
1 Unit
基因靶点:KCNA10
反应种属:Human
应用说明:Stable or Transient mammalian expression
cDNA描述:Full length Clone DNA of Human potassium voltage-gated channel, shaker-related subfamily, member 10
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文献和实验在基因功能研究过程中,常常使用的一种方法就是将目的基因转到靶细胞内进行瞬时表达(transient expression),以流式细胞仪检测细胞周期的变化,观察转基因对细胞增殖的影响。由于各种转基因方法的不同,转基因的效率也不同,往往是仅有一部分细胞可以表达目的基因,没有转基因的细胞将影响检测的结果。如何将已经转基因的细胞同未转基因的细胞区分开来进行检测,是一个技术上的难点。常用的一种方法就是将表达绿色荧光蛋白的质粒和目的基因共转染;在共转染时,加入目的基因表达质粒的量远高于表达GFP质粒
: 不需要包装病毒,起始简单; 依赖细胞的转染效率,仅适合 293T、HeLa 等易转染细胞; 瞬时表达质粒也会短暂抗药,筛选背景大、周期长、克隆差异大; 目前已较少作为构建稳转株的优先方案,多见于一些经典细胞系建立的历史方案。 --- 五、四种方法怎么选? 慢病毒 转座子 CRISPR KI 质粒筛选 难转染细胞 ✅ 优先考虑 ❌ 较难 ⚠️ 可做但效率低 ❌ 不适合 定点整合 ❌ 随机 ❌ 半随机 ✅ 精确 ❌ 随机 过表达/敲低 ✅ 最常用 ✅ 可用 ⚠️ 非其定位
1)Flp-In系统 产生背景 随着新技术的不断革新,针对真核质粒转染构建稳定表达细胞株的方法也不断地创新,出现了TALEN、IOS、Cas9和Flp-In等技术,不断地提高稳定表达细胞株构建的成功率。 Flp-In系统——以其独特的优势,广泛应用于构建过表达或静默特定基因的稳定表达细胞株,用于特定基因的功能研究。Flp-In系统依据酿酒酵母的DNA重组系统的特点,高效构建稳定哺乳动物表达细胞株。这种DNA重组系统应用重组酶(Flp)和定点重组技术,将目的基因插入到哺乳动物指定的基因组中
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