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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20℃ to -80℃
- 保质期:
3个月
- 英文名:
Human CDK19 Gene ORF cDNA clone expression plasmid
- 库存:
99
- 供应商:
北京义翘神州科技股份有限公司
- 规格:
1 Unit
基因靶点:CDK19
反应种属:Human
应用说明:Stable or Transient mammalian expression
cDNA描述:Full length Clone DNA of Human cyclin-dependent kinase 19
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文献和实验选择是RNAi实验成败的关键。哺乳动物细胞RNAi实验中,使用最广泛且最有效的是21bp siRNA。siRNA由正义链和反义链组成,两条链3’端均有2个碱基突出,一般为UU或dTdT,其中正义链的前19nt与靶基因序列相同。1. siRNA设计的原则SiRNA双链设计时,一般在靶mRNA起始密码下游100—200bp至翻译终止密码上游d0—100bp的范围内搜寻AA序列,并记录每个AA3’端相邻19个核苷酸作为候选si.RNA靶位点。其中AA(N19)TT是最理想的序列,若靶mRNA中无此序列,亦可
试剂将si s转到细胞内。而采用si 表达载体和基于PCR的表达框架则属于:从转染到细胞的DNA模版中在体内转录得到si s。这两种方法的优点在于不需要直接操作。 4. si 表达载体 多数的si 表达载体依赖3种聚合酶III 启动子(pol III)中的一种,操纵一段小的发夹si 在哺乳动物细胞中的表达(1�4)。这3类启动子包括大家熟悉的人源和鼠源的U6启动子和人H1启动子。之所以采用 pol III启动子是由于它可以在哺乳动物细胞中表达更多的小分子,而且它是通过添加一串(3到6个)U来终止转录
模制备。 Silencer Express siRNA Expression Cassette Kits提供人源和鼠源的U6启动子或者人源H1启动子元件可供选择,并已经过c-fos基因抑制的检验。 最适用于:筛选siRNA序列,在克隆到载体前筛选最佳启动子 不适用于:长期抑制研究。(如果克隆到载体后就可以了) 三、siRNA的转染 将siRNA、siRNA表达载体或SECs导入哺乳动物细胞中是诱导RNAI发生的关键。有许多转染试剂可供选用,最常用的是脂质体转染试剂。某些情况下电穿孔法亦可用,但易导致
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