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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20℃ to -80℃
- 保质期:
3个月
- 英文名:
Human PEAK1 Gene ORF cDNA clone expression plasmid
- 库存:
99
- 供应商:
北京义翘神州科技股份有限公司
- 规格:
1 Unit
基因靶点:PEAK1
反应种属:Human
应用说明:Stable or Transient mammalian expression
cDNA描述:Full length Clone DNA of Human pseudopodium-enriched atypical kinase 1
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文献和实验及Dicer的作用下,大量扩增siRNA。将siRNA的3’末端标记上FITC使它丧失引物的作用,在将其转入哺乳动物细胞内,它抑制靶基因的作用并没有受到影响。因而研究者推测,哺乳动物细胞内不存在象线虫那样的依赖于RDRP的RNAi放大机制。在哺乳动物细胞中瞬时转染dsRNA后,dsRNA的作用只维持了三天。而将表达dsRNA的载体转入哺乳动物细胞后筛选出的稳定表达株中,在转染八周后dsRNA仍能有效的抑制靶基因的表达。利用载体表达出的dsRNA为发夹结构,其环状部位的核苷酸的序列和数目对dsRNA的作用
在基因功能研究过程中,常常使用的一种方法就是将目的基因转到靶细胞内进行瞬时表达(transient expression),以流式细胞仪检测细胞周期的变化,观察转基因对细胞增殖的影响。由于各种转基因方法的不同,转基因的效率也不同,往往是仅有一部分细胞可以表达目的基因,没有转基因的细胞将影响检测的结果。如何将已经转基因的细胞同未转基因的细胞区分开来进行检测,是一个技术上的难点。常用的一种方法就是将表达绿色荧光蛋白的质粒和目的基因共转染;在共转染时,加入目的基因表达质粒的量远高于表达GFP质粒
shRNA表达质粒多采用RNA聚合酶III启动子,如人源H1或鼠源U6启动子,pol III在哺乳动物细胞(绵羊是哺乳动物)内引导非编码小RNA的转录,转录产物无poly(A)尾,且在转录过程中遇到连续4-5个U时转录终止。此载体最后转录出的产物是经折叠形成的发夹状小RNA(shRNA); shRNA 在细胞内被Dicer酶切割成3’端带有两个U突出的siRNA,进而启动RNAi,介导基因沉默。载体中的间隔序列为9个核苷酸时最为有效。 是可行的! 高成胡君
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