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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20℃ to -80℃
- 保质期:
3个月
- 英文名:
Human Nephrin Gene ORF cDNA clone expression plasmid
- 库存:
99
- 供应商:
北京义翘神州科技股份有限公司
- 规格:
1 Unit
基因靶点:NPHS1
反应种属:Human
应用说明:Stable or Transient mammalian expression
cDNA描述:Full length Clone DNA of Human nephrosis 1, congenital, Finnish type (nephrin)
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文献和实验决定簇标记进行原位固定。这种方法既不需要对不同的蛋白分别进行表达和纯化,又可以在使用前才产生蛋白,从而解决了保持蛋白稳定的难题。具体说,为了既能够附着DNA,又能够保持DNA的构向以利于转录和翻译,研究者利用紫外线将补骨脂素-生物素(psoralen-biotin)和DNA表达质粒接合在一起。而且,每一个被表达的蛋白的碳端都标记了一个谷胱甘肽S- 转移酶(Glutathione S-transferase,GST),能够通过和预先印记在表达质粒旁边的GST抗体作用,从而使表达的蛋白固定在阵列
物污染,和不同实验之前的不同细胞的交叉污染。养成良好的实验室习惯,时刻注意污染源存在,谨防实验材料和污染源接触,建立严格的细胞系鉴定标准,才能尽可能的杜绝污染问题超出的实验损失。3. 常规细胞系转染试剂 MegaTran1.0MegaTran 1.0 是一款新型的非脂质体聚合物转染试剂,特别适于大量 DNA 的转染,包括瞬时转染获得过表达蛋白和利用 cDNA 芯片或 shRNA 文库做高通量筛选。ü 与目前最常用的转染试剂相比,转染效率更高ü 对 293F 悬浮细胞有效ü 通过瞬时转染可增加蛋白产量ü 毒性
。 3)在用DNA于氯喹孵育细胞后,移去培养基,用磷酸盐缓冲液洗涤细胞,加5 ml预热的完全培养基。细胞于孵箱中培养1~6天。继续步骤6检测转染DNA的瞬时表达,或者直接进行步骤7以获得稳定转化子。 (3)丁酸钠处理细胞 丁酸钠的作用机制并不确定;但它是组蛋白乙酰化形成使外来质粒DNA趋于转录的染色质结构(Workman and Kingston 1998)。 1)甘油休克处理后,将500 mmol/L丁酸钠直接加入生长培养基(甘油处理的步骤d)。细胞类型不同
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