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- XK0104
- 国产
- 2025年07月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 英文名：
NP-40 Lysis Buffer
- 保质期：
12个月
- 供应商：
上海晅科生物科技有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
100ml
1. NP-40裂解液(NP-40 Lysis Buffer)是一种比较温和的细胞组织裂解液。NP-40裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP和co-IP等。
2. NP-40裂解液的主要成分为 Tris，NaCl，NP-40以及leupeptin等多种抑制剂。可以有效抑制蛋白降解。
3. 用NP-40裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂， 不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度，可以用我们生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。
使用方法:
对于培养细胞样品：
1. 取适当量的 NP-40 裂解液混匀，在使用前数分钟内加入 PMSF，使 PMSF 的最终浓度为 1mM。
2. 对于贴壁细胞，去除培养液用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。加入适量裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。轻轻的摇晃约 5-10 分钟。充分裂解后，10000-14000g离心 10 分钟，取上清，即可进行后续操作。裂解液用量说明： 用于不同规格标准培养板裂解液容量
板规格/表面积 试剂容量
100mm 500-1000μι
60mm 250-500μι
6-well plate 200-400μιper well
24-well plate 100-200μιper well
96-well plate 50-100μιper well
3. 对于悬浮细胞，离心收集细胞，用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍.加入适量裂解液用枪吹打把细胞吹散。用手指轻弹或旋涡震荡 5-10 分钟以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装然后再裂解。充分裂解后，10000-14000g 离心 10 分钟，取上清，即
可进行后续操作。
对于组织样品：
1.手术切除的组织块迅速置于预冷的生理盐水中，漂洗数次，以清洁表面的血迹，将组织称量后切成几个较小的组织块放入组织匀浆器中。
2. 取适当量的 NP-40 裂解液混匀，在使用前数分钟内加入 PMSF，使 PMSF 的最终浓度为 1mM。
3. 按组织净重（g）：裂解液(ml)=1：10 的比例，加入相应体积的裂解液进行匀浆(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液 如果需要高浓度的蛋白样品 可以适当减少裂解液的用量) 。
4. 用玻璃匀浆器匀浆直至充分裂解。
5. 充分裂解后10000-14000g 离心 3- 5 分钟取上清即可进行后续作。
注：NP-40 裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组 DNA 等的复合物。在不检测和基因组 DNA 结合特别紧密的蛋白的情况下，可以直接离心取上清用于后续实验；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物，随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子，例如 NF-kappaB、p53 等时，通常不必进行超声处理，就可以检测到这些转录因子。
注意事项：
1. 抽提蛋白的所有步骤都需在冰上或 4℃进行。建议将样品分装成合适的量，然后冷冻干燥或直接以液体状态置-20℃中保存，不要反复冻融。
2. 需自备 PMSF。建议在临用前数分钟内加入 PMSF
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文献和实验细胞裂解分析化学,论坛,化学分析,仪器分析,分析测试,色谱,电泳,光谱u5kLlIO T 采用温和的裂解条件，不能破坏细胞内存在的所有蛋白质－蛋白质分析化学论坛~O/b:te} 相互作用，多采用非离子变性剂（NP40或Triton X-100)。每种细胞的裂解条件是不一样的，通过经验确定。 不能用高浓度的变性剂（0.2％SDS)，细胞裂解液中要加各种酶抑制剂，如商品化的cocktailer。 2、如何得到比较纯的包涵
降解测序。 五、注意事项 细胞裂解采用温和的裂解条件，不能破坏细胞内存在的所有蛋白质－蛋白质相互作用，多采用非离子变性剂（NP40 或 Triton X-100）。每种细胞的裂解条件是不一样的，通过经验确定。不能用高浓度的变性剂（0.2％ SDS），细胞裂解液中要加各种酶抑制剂，如商品化的 cocktailer。 使用明确的抗体，可以将几种抗体共同使用。 使用对照抗体： ① 单克隆抗体：正常小鼠的 IgG 或另一类单抗 ② 兔多克隆抗体：正常兔
，比如 RIPA，虽然裂解剧烈，但是无法维持蛋白天然构象，会破坏互作蛋白对。 如果自配，建议采用温和系统，比如 NP40/Triton 0.1%-1%；SDS ≤0.1%，盐离子≤150 mM 记得要加蛋白酶和/或磷酸酶抑制剂 结合液---利于蛋白之间的相互结合，要考虑孵育（结合）顺序 如果抗体和 beads 先孵育，建议 选择 pH 8.2（更常用）或者 pH 5.0 如果选用纯抗原作为诱饵蛋白 X 去拉裂解液中的靶蛋白 Y，抗体和抗原的结合 buffer 选择中性PBS/TBS 如果诱饵蛋白 X
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