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- 文献和实验
- 技术资料
- 样本:
用于检测血浆,血清及相关液体等样本
- 库存:
34
- 标记物:
酶标板,试剂,标准品等
- 适应物种:
大鼠、小鼠、豚鼠、仓鼠、裸鼠、兔子、猪、犬、猴、马、牛、马铃薯、鹿、羊、鸡、鸭、鱼、人、等动植物。
- 应用:
酶联免疫法
- 检测方法:
详见说明书
- 检测范围:
仅供科研使用
- 供应商:
抚生
- 规格:
48T/96T
实验流程图:
样本处理及要求:
1. 产品仅用于科研血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。
仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
2. 高尔基体膜蛋白检测试剂盒血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。
3. 尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
5. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融.
7. 产品仅用于科研不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
产品名称:高尔基体膜蛋白检测试剂盒
英文名称: GOLIM4
规格:48T/96T
主要成分:酶标板,试剂,标准品等。
试剂盒种属:马铃薯、鹿、羊、鸡、鸭、鱼、人、大鼠、小鼠、豚鼠、仓鼠、裸鼠、兔子、猪、犬、猴、马、牛等动植物。
检测目的:用于测定血清,血浆及相关液体等样本。例如适合检测包括血清、血浆、尿液、胸腹水、灌洗液、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等标本..
ELISA的操作要点:
标本的采取和保存:可用作ELISA测定的标本十分广泛,体液(如血清)、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液、粪便)等均可作标本以测定其中某种抗体或抗原成份。有些标本可直接进行测定(如血清、尿液),有些则需经预处理(如粪便和某些分泌物)。大部分ELISA检测均以血清为标本;
试剂的准备:所需试剂、蒸馏水、去离子水、自配的缓冲液;
加样:一般有3次加样步聚,即加标本,加酶结合物,加底物。
保温:ELISA中一般有两次抗原抗体反应,即加标本和加酶结合物后。抗原抗体反应的完成需要有一定的温度和时间,这一保温过程称为温育。
洗涤:洗涤的方式除某些ELISA仪器配有特殊的自动洗涤仪外,手工操作有浸泡式和流水冲洗式两种。
显色和比色:显色是ELISA中的最后一步温育反应,此时酶催化无色的底物生成有色的产物。比色前应先用洁净的吸水纸拭干板底附着的液体,然后将板正确放入酶标比色仪的比色架中。仪器准备为酶标仪。
结果判断:分定性判定和定量判定。
注意事项:
1.高尔基体膜蛋白检测试剂盒使用前请保存在2-8℃。复溶后的标准品若未用完,请废弃。
2. 微量试剂运输中颠簸和可能的倒置,会使液体沾到管壁或瓶盖。因此使用前请1000转/分离心1分钟,以使附着管壁或瓶盖的液体沉积到管底。
3. 从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶,属于正常现象,微加热至40℃使结晶完全溶解后再配制洗涤液。
(加热温度不要超过50℃)使用时洗涤液应为室温。
4. 不同批号的试剂盒组份避免混用(洗涤液和反应终止液除外)。
5. 产品仅用于科研充分轻微混匀对反应结果尤为重要,zui好使用微量振荡器(使用zui低频率),如无微量振荡器,可在反应孵育前手工轻轻混匀。
6. 在试验中标准品和样本检测时建议作双孔检测。
7. 试验中所用的试管和吸头均为一次性使用,严禁在不同的液体之间混用!否则将影响试验结果。
8. 试验中请穿着试验服并带乳胶手套做好防护工作。特别是检测血液或者其他体液标本时,请按国家生物试验室安全防护条列执行。
nti-APC 活化蛋白C抗体 0.1ml
Anti-Apelin 脂肪炎症因子Apelin抗体 0.1ml
Anti-Apelin receptor/APJ receptor Apelin receptor抗体 0.1ml
Anti-APEX1/Ref-1 氧化还原因子1抗缺陷蛋白7抗体 Ⅰ型前胶原羧基端原肽(PⅠCP)ELISA试剂盒 PⅠCP ELISA Kit
高尔基体膜蛋白检测试剂盒E3泛素连接酶MUL1抗体 Ⅰ型前胶原氨基端原肽(PⅠNP)ELISA试剂盒 PⅠNP ELISA Kit
纤微丝相关糖蛋白2抗体 Ⅰ型前胶原(PCⅠ)ELISA试剂盒 PCⅠ ELISA Kit
肥大细胞类糜蛋白酶1抗体 Ⅰ型胶原交联羧基端肽(CTXⅠ)ELISA试剂盒 CTXⅠ ELISA Kit
甲硝唑单克隆抗体 Ⅰ型胶原交联氨基端肽(NTXⅠ)ELISA试剂盒 NTXⅠ ELISA Kit
线粒体核糖体蛋白L12抗体 Ⅰ型胶原α2(COL1α2)ELISA试剂盒 COL1α2 ELISA Kit
线粒体核糖体蛋白L39 Ⅰ型胶原α1(COL1α1)ELISA试剂盒 COL1α1 ELISA Kit
酮酸脱氢酶激酶1抗体 Ⅰ型胶原(COL1)ELISA试剂盒 COL1 ELISA Kit
丝裂原活化的蛋白激酶p38β抗体 Ⅰ类主要组织相容性复合体G(MHCG)ELISA试剂盒 MHCG ELISA Kit
核基质蛋白3抗 0.1ml
Anti-ATH Ⅲ 凝血酶Ⅲ抗体 0.1ml
Anti-APG4B/AUTL1 APG4B细胞自噬相关抗体 0.1ml
衔接因子蛋白含pH域磷酸酪氨酸结合域和亮氨酸拉链基元1抗体 0.1ml
Anti-AQP1 水通道蛋白-1抗体 0.1ml
Anti-AQP5 水通道蛋白-5抗体 0.1ml
Anti-AQP9 水通道
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文献和实验,从而提高目的蛋白检出率[4]。 (2)分离亚细胞结构富集目的蛋白 如果目的蛋白表达量较低或增溶后仍未检出条带,可根据目的蛋白定位进行亚细胞结构分离以富集目的蛋白,降低检测难度[5]。例如:当目标蛋白为跨膜蛋白时,其表达量低且难以提取,这种情况下可以先富集膜蛋白后再进行 WB 检测,有效降低检测难度且检测结果更清晰(如图 3)。使用柱式法亚细胞结构分离系列工具,无需超高速离心,无需自配溶液,无需研磨仪即可分离细胞膜、细胞核、内质网、高尔基体、溶酶体等亚细胞结构,大大降低了 WB 检测难度
在 RIPA 不可溶组分中,如果样品又是研磨困难的组织样品,则优先选择对膜蛋白和小分子量蛋白提取效率更高且不需要匀浆仪的 Invent 柱式法工具进行总蛋白提取[1]。 * 目标蛋白在某个特定细胞器上(内质网,高尔基体,溶酶体,线粒体,内体等)表达,且蛋白表达量较低,若用总蛋白检测时条带较弱,则推荐使用 Invent 柱式法工具富集特定细胞器蛋白后再检测,提高检出效率。 * 研究蛋白定位或研究蛋白转运过程,推荐使用 Invent 柱式法工具进行细胞组分分离,将样品分离为不同组分如分成细胞核,细胞浆,细胞
蛋白质从内质网转运到高尔基体以及从高尔基体转运到溶酶体、分泌泡、细胞质膜、细胞外等则是由小泡介导的,这种小泡称为运输小泡(transport vesicles)。内膜系统的蛋白定位,除了内质网本身之外,其它膜结合细胞器的蛋白定位都是通过形成运输泡,将蛋白质从一个区室转运到另一个区室。小泡的形成是通过出芽的方式,到达目的地时则是通过膜融合的方式使小泡成为另一个区室的一个部分,实现蛋白质的运输。在这个过程中不仅运输了小泡内的蛋白质,同时也将膜脂和膜蛋白从一个区室运到了另一个区室。
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