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Tol2系统转基因服务
Tol2系统转基因服务
1.技术简介
Tol2转座子由于很早是从鱼类中发现的，在斑马鱼的研究中应用已经非常广泛，并且有很高的转基因效率，之后发现在除了斑马鱼以外的其他非脊椎动物中也有非常高的转座效率，在小鼠和人的细胞系中的应用已经有广泛的报道，与以往在小鼠中常用的转座子Sleeping Beauty和PiggyBac相比，Tol2的转座效率甚至更高。多种细胞系和动物实验表明，Tol2系统介导的转基因没有明显的插入位点特异性。插入片段的大小基本不会影响Tol2系统的正常作用，我公司利用Tol2系统在小鼠上进行了13kb片段的转基因，且得到了较高的转基因效率。同时我们成功将该系统应用到转基因大鼠和稳定基因表达细胞系构建中。 因此Tol2系统成为构建转基因动物模型和细胞系的强有力工具。
2.Tol2 转基因系统的优势
• 更高的转基因效率
• 无明显的插入位点倾向性
• 可携带大片段外源DNA--已成功转入13kb片断
3.Tol2 转基因系统应用
3.1.简单、高效建立稳定基因表达细胞系
与质粒转染，药物抗性筛选建立稳定表达细胞株相比，Tol2系统简单、成功率高、周期短。 与病毒系统相比，操作实验简单、费用低廉。
3.2.转基因大、小鼠的制备
与传统DNA原核注射相比，Tol2系统采用胞浆注射，操作简单，成功率高。尤其是克服了传 统DNA原核注射制备转基因大鼠成功率低的问题。
4.服务类型
| 服务类型 |
质控方式 |
产品形式 |
| 转基因细胞系 |
两对引物PCR基因型检测 |
冻存细胞 |
| 转基因小鼠 |
两对引物PCR基因型检测 |
F0代小鼠 |
| 转基因大鼠 |
两对引物PCR基因型检测 |
F0代大鼠 |
5.制备转基因细胞系不同方式的差异比较
| 制备方式 |
效率 |
制备方式 |
稳定性 |
| DNA直接转染法 |
低（~5%），周期长 |
简单，DNA直接转染 |
不稳定 |
| Tol2转座子法 |
高（~20%），周期短 |
简单，一次克隆，与转座酶共转染 |
稳定 |
| 逆转录病毒法 |
高（~100%） |
制备复杂，需进行病毒包装和分离 |
稳定 |
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文献和实验中文摘要 ： 蛋白质分子间相互作用与识别是21世纪生命科学研究的前沿和热点. 分子对接方法是研究这一课题有效的计算机模拟手段. 通常，蛋白质-蛋白质分子对接包括四个阶段：搜索受体与配体分子间的结合模式，过滤对接结构以排除不合理的结合模式，优化结构，用精细的打分函数评价、排序对接模式并挑选近天然构象. 结合国内外研究蛋白质-蛋白质分子对接方法进展和本研究小组的工作，对以上四个环节做了详细的综述
4. 其他的药物诱导模型 类风湿关节炎作为近年来国内外研究的热点，除了上述常见的三种诱导模型之外，还有很多其他的诱导模型，如链球菌细胞壁诱导的关节炎，在注射 24h 后即可出现明显的急性关节炎症状，后期可演变成长期慢性关节炎，可用于研究免疫细胞炎症机制；降植烷诱导的关节炎通过降植烷诱导小鼠产生红斑狼疮特异性抗体，表现系统性红斑狼疮特征，进而导致关节炎症发生；蛋白聚糖诱导的关节模型[11]是目前唯一侵犯中轴骨系统的系统性自身免疫小鼠模型，是目前研究脊柱关节炎的热点模型。 二、转基因型关节炎 转基因型 RA
； 3. 可应用范围广：Cre重组酶是一种比较稳定的蛋白质，可以在生物体不同的组织、不同的生理条件下发挥作用，所以说Cre-loxP系统的可应用范围非常广； 4. 可由二型启动子启动表达：Cre重组酶的编码基因可由任何一种二型启动子驱动，由此保证Cre重组酶在生物体不同的细胞、组织、器官或者在不同的发育阶段或不同的胜利条件下表达，从而实现较高的组织和细胞特异性。Cre-loxP系统的操作方式 1. 转基因动物依赖的基因重组 一般情况下，科学家们利用Cre-loxP系统进行基因操作时
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