- ¥360 - 1530
- geltinsa
- JK-G8059
- 国内
- 2025年07月16日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
97
- 英文名：
Tuner（DE3）pLysS Chemically Competent Cell
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海晶抗生物工程有限公司
- 保存条件：
低温保存
- 规格：
10×100ul/50×100ul
| 规格： | 10×100ul | 产品价格： | ¥360.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 50×100ul | 产品价格： | ¥1530.0 |
Tuner（DE3）pLysS Chemically Competent Cell
产品货号： JK-G8059
保存条件： -80℃
产品规格 :
| Tuner（DE3）pLysS | 10×100μl |
| 50×100μl |
基因型
F -ompT hsdSB(rB- mB- ) gal dcm lacY1 (DE3)pLysS CamR
简要说明
JKBio Tuner(DE3)菌株是BL21菌株的lacZY基因 (半乳糖苷透性酶基因)突变株，此突变导致IPTG以均一速度进入体系中大肠杆菌的每个细胞，产生更加严格、均一的浓度依赖。将具有氯霉素抗性的pLysS质粒导入Tuner(DE3)细胞中即是Tuner(DE3) pLysS，pLysS表达T7溶菌酶，T7溶菌酶可以与T7 RNA聚合酶结合抑制其转录活性，进而降低目的基因的背景表达水平，但不干扰IPTG诱导的表达，非常适合毒性蛋白的原核表达。该菌株染色体整合了λ噬菌体DE3区 (DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶)，可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶，可用于pET系列，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达。Tuner(DE3)pLysS感受态细胞由特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率达107 cfu/μg DNA。
注意事项
1. 感受态细胞在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。
2. 转化高浓度的质粒可相应减少终用于涂板的菌量。
3. 诱导时，IPTG浓度可选（0.1-10 mM均可）。
4. 为获得需要量的蛋白，佳诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。
5. Tuner(DE3)pLysS菌株携带pLysS质粒，除复苏培养基为无抗生素外，其余所用培养基、培养液均应含有34 µg/ml氯霉素，以防质粒丢失。
操作说明
1. 取100μl冰上融化的Tuner（DE3）pLysS感受态细胞，加入目的质粒并轻轻混匀，冰上静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基(2YT或LB)，混匀后37℃，200rpm复苏60分钟。
4. 5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。
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文献和实验由它们的天然启动子驱动。在 Rosetta （ DE3 ） pLysS 和 Rosetta （ DE3 ） pLacI 中，稀有 tRNA 基因存在于分别带有 T7 溶菌酶和 lac 阻遏基因的同一质粒上。 Tuner 菌株为 BL21 的 lacZY 缺失突变株，能够调整培养物中所有细胞的蛋白表达水平。 lac 通透酶（ lacY ）突变使得 IPTG 均匀进入群体所有细胞，从而具有浓度依赖、水平均一的诱导表达。通过调整 IPTG 浓度，表达可从极低水平调节到极强、完全诱导的表达水平（通常
很多新手在问做原核表达需要考虑的载体和菌株的选择，现系统地解答一下，供新手借鉴。
的 tRNAs 。这样 Rosetta 菌株提供了“万能”的翻译，从而避免因大肠杆菌密码子使用频率导致的表达限制。 tRNA 基因由它们的天然启动子驱动。在 Rosetta （ DE3 ） pLysS 和 Rosetta （ DE3 ） pLacI 中，稀有 tRNA 基因存在于分别带有 T7 溶菌酶和 lac 阻遏基因的同一质粒上。 Tuner 菌株为 BL21 的 lacZY 缺失突变株，能够调整培养物中所有细胞的蛋白表达水平。 lac 通透酶（ lacY ）突变使得 IPTG 均匀进入群体
的。每一个宿主细胞都像一个微观的小工厂，按照细胞固有的程序完成“你给它们安排的生产任务”——因为很难亲眼观察微观世界中表达是如何进行的，当出现问题时，我们需要经验判断问题所在。宿主细胞对原核表达可能会产生哪些影响呢？ 知其然还要知其所以然。比如，菌株内源的蛋白酶过多，可能会造成外源表达产物的不稳定，所以一些蛋白酶缺陷型菌株往往成为理想的起始表达菌株。堪称经典的BL21 系列就是lon 和ompT 蛋白酶缺陷型，也是我们非常熟悉的表达菌株。大名鼎鼎的BL21(DE3)融源菌则是添加T7聚合
