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- 百奥莱博
- YT481-CGR
- 北京
- 2025年07月12日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
333
- 英文名：
N-His plasmid（with CMV promoter）
- 保质期：
长期
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
1μg
特别提示：包括N端His标签融合蛋白质粒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
产品名称：N端His标签融合蛋白质粒
英文名称：N-His plasmid（with CMV promoter）
产品货号：YT481
产品规格：1μg
本质粒是用于在哺乳动物细胞中表达N端和His tag(His标签)融合的目的蛋白的表达质粒。含有CMV启动子可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达；在多克隆位点的5"端含有一个可以编码His标签的序列，因此可以表达出含有His标签的融合蛋白，可以方便地使用抗His的抗体来识别目的蛋白，有利于目的蛋白检测和分离纯化。质粒为卡那霉素抗性。转染细胞后，可使用G418筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。
本质粒质粒的主要信息如下：
| Feature Nucleotide | Position |
| CMV promoter | 1-602 |
| T3 promoter and T3 primer binding site | 620-639 |
| His tag | 679-696 |
| multiple cloning site | 699-772 |
| T7 promoter and T7 primer binding site | 815-836 |
| SV40 polyA signal | 847-1230 |
| f1 origin of ss-DNA replication | 1368-1674 |
| bla promoter | 1699-1823 |
| SV40 promoter | 1843-2181 |
| neomycin/kanamycin resistance ORF | 2216-3007 |
| HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal | 3008-3466 |
| pUC origin | 3595-4262 |
本质粒的图谱如下：
使用说明：
1. 首次使用时请先取少量本质粒转化大肠杆菌，进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定，或通过测序进行鉴定。
2. 本质粒在其多克隆位点适当酶切后可以插入待表达的目的基因，需注意插入基因片段和tag之间的读码框要一致，即需要避免发生移码突变。构建的质粒可以用常规方法转染细胞。
储存条件：-20℃。
我公司销售的N端His标签融合蛋白质粒报价，质量上佳，价格普惠，欢迎广大新老客户踊跃订购。
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文献和实验一，酵母表达系统毕赤酵母表达系统（invitrogen公司）：分泌型质粒pPIC9K，宿主菌毕赤酵母GS115分泌型质粒pPICZalpha （甲醇诱导）宿主菌毕赤酵母x33分泌型质粒pHIL-S1二，原核表达质粒表达宿主菌为BL21(DE3)系列带His标签（N端）：PET5-(a)氨苄抗性带His标签（N端）：PET28-(a)卡那抗性带His标签（C端）：PET24-(b)卡那抗性带His标签（C端）：PET21-(a)氨苄抗性带His标签（N端）+TrxA(硫氧还蛋白)：PET-32
是由IRES序列行使功能的，但要注意的是，这部分的翻译水平比较低，比前面的MCSA大概低一个数量级。所以要选择好两个蛋白的各自位置。 3)、哺乳动物/真核荧光载体 pEGFP-N1 pEGFPN1 表达 绿色 荧光蛋白和目的基因的融合蛋白，目的基因位于N端 kan/neo 4.7kb E. coli/mammals pEGFP-N3 pEGFPN3 表达 绿色 荧光蛋白和目的基因的融合蛋白，目的基因位于N端 kan/neo 4.7kb E. coli/mammals pEGFP
经常用于亲和纯化的His-Tag，该His-Tag也可用于通过蛋白质印迹纯化后鉴定融合蛋白。以下是通过Ni-NTA旋转试剂盒（QIAGEN）在天然条件下纯化蛋白质的方法。蛋白质印迹分析融合蛋白的表达。在大肠杆菌 BL21菌株中表达TBO的融合蛋白，经NI-NTA旋转试剂盒纯化后，使用抗His标签抗体通过Western印迹分析蛋白质。Trx。Tag + TBO为22 KDa将来自5-ml培养体积的沉淀重悬于630μl裂解缓冲液（NPI-10）中，在冰上以30秒的间隔超声处理细胞悬浮液10秒短暂10
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