EGY48酵母感受态细胞

EGY48酵母感受态细胞

EGY48  Chemically Competent Cell

产品货号： JLC-G042    
           
保存条件： -80℃   

产品规格：10×100μl  50×100μl

产品介绍：

基因型 : 
MATα, ura3, his3, trp1, LexAop (x6)-LEU2

简单说明 : 
EGY48菌株是Clontech公司开发的LexA 系统酵母双杂实验用菌株，MATa型，可直接转化质粒进行蛋白互作验证或筛库试验；Transformation  marker为: his3, trp1, ura3，报告基因为：LEU2；报告基因UAS（上游激活序列）来源于LexA op(x6)，只有当Bait和Prey互作时才能启动LEU2表达。EGY48-LexA酵母双杂系统系统需要三种质粒配套使用：pLexA、pB42AD、p8op-LacZ。

质粒pLexA的筛选标志为HIS3，用于表达DNA-BD(来自原核的202个氨基酸残基组成的LexA蛋白)与目标蛋白(Bait)的融合蛋白；质粒pB42AD的筛选标志为TRP1，用于表达AD(来自疱疹病毒的88个氨基酸残基组成的B42AD蛋白)与目标蛋白（Prey）的融合蛋白；报告质粒p8op-LacZ的筛选标志为URA3，报告基因为LacZ，报告基因UAS来源于LexA op(x8) ，只有当Bait和Prey互作时才能启动LacZ表达。 High5TM系列EGY48感受态细胞经特殊工艺制作，-80℃可保存三个月，经PGBKT7质粒检测转化效率>104cfu/μg DNA 。

操作说明 : 
1. 取100 µl冰上融化的EGY48感受态细胞，依次加入预冷的目的质粒2-5 µg，Carrier DNA (95-100度5 min,快速冰浴，重复一次) 10 µl，PEG/LiAc 500µl并吸打几次混匀，30度水浴30 min (15 min时翻转6-8次混匀)。 

2. 将管放42℃水浴15 min (7.5 min时翻转6-8次混匀)。
 
3. 5000 rpm离心 40 s弃上清，ddH2O 400 µl 重悬，离心 30s弃上清。
 
4. ddH2O 50 µl重悬，涂板，29℃培养48-96 h。

Preparation of Media：
YPDA （1L）:
Tryptone                                  20g
yeast extract                             10g 
0.2% adenine                            15ml
补水到 950ml，  用盐酸调PH到     6.5
Agar                                         20g (for plates only)
121度，15分钟高压灭菌，待培养基温度降到55度时，加入已过滤的40% 葡萄糖 50 ml0.2% adenine(1L)Adenine    2g补水到1L，溶解后高压灭菌或0.22um滤膜过滤除菌

注意事项 :
1. 感受态细胞在冰上融化。

2. 转化高浓度的质粒可相应减少终用于涂板的菌量。

3. 同时转化2-3种质粒时可增加质粒的用量。

4. EGY48感受态细胞酵母菌株对高温敏感，适生长温度为27-30℃；高于31℃，生长速度和转化效率呈指数下降。

5. 酵母在缺陷培养基中生长速度比YPDA培养基慢，培养基中缺陷成分越多，生长越慢，以转化涂板为例：涂YPDA平板29℃，48h培养可见直径1mm克隆；涂SD单缺平板29℃，48-60h培养可见直径1mm克隆，涂SD双缺平板29℃，60-80h培养可见直径1mm克隆，涂SD三缺或四缺平板平板29℃，80-90h培养可见直径1mm克隆。