- ¥1000 - 3600
- geltinsa
- JLC-G7023
- 国内
- 2025年07月12日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
34
- 英文名：
Stbl3 Electroporation-Competent Cell
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海机纯实业有限公司
- 保存条件：
低温保存
- 规格：
5×50ul/20×50ul
| 规格： | 5×50ul | 产品价格： | ¥1000.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 20×50ul | 产品价格： | ¥3600.0 |
Stbl3 Electroporation-Competent Cell
产品货号： JLC-G7023
保存条件： -80℃
产品规格 : 5×50μl 20×50μl
产品介绍 :
基因型 :
F- mcrB mrr hsdS20(rB-,mB-) recA13 supE44 ara-14 galK2 lacY1 proA2 rpsL20(StrR) xyl-5λ-leu mtl-1 endA1+
简单说明 :
Stbl3菌株来源于 HB101 E. coli strain，是慢病毒载体系统推荐使用的菌株。基因组含有重组酶recA13突变，可有效抑制长片段末端重复区的重组，降低错误重组的概率；但不含核酸酶endA1突变，体内核酸酶含量较高，提取质粒时务必使用质粒提取试剂盒中去蛋白液。此菌株具有链霉素抗性，不存在lacIqZΔM15，不可用于蓝、白斑筛选。High5TM系列Stbl3感受态细胞经特殊工艺制作，经pUC19检测转化效率>108cfu/μg DNA。
操作说明 :
1. 0.1cm 电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上 5分钟，待其沥干水分，正置 5分钟，使乙醇充分挥发，待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面 0.5 cm以方便盖上杯盖，冰中静置 5分钟充分降温。
2. 取-80℃保存的Stbl3电击感受态细胞插入冰中5 分钟，待其融化，加入目的 DNA (质粒或连接产物)并用手拨打EP 管底轻轻混匀，避免产生气泡，立即插入冰中。
A. 测定转化效率使用 1 μl 10 pg/μl 的对照质粒 pUC19；
B. 对于连接产物，请用乙醇沉淀DNA 后加入适量 TE缓冲液 (10mM TrisHCl, pH7.5;1mM EDTA)重悬，DNA 浓度不超过100ng/μl，体积不超过 5μl/50μl 感受态
3. 用200 μl枪头将感受态-DNA 混合物快速移到电击杯中，避免产生气泡，盖上杯盖。
4. 启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 Ω，V=1.8 kV (此为 BioRad 电转仪推荐参数，也可按所用 电转仪推荐的参数操作），将电击杯快速放入电转槽中，电击完成快速插入冰中。
5. 立即 向电击杯中加入1000 μl不含抗生素的无菌培养基 S.O.C.，混匀后转移到空50ml管中，并用1ml SOC轻柔冲洗电转杯并转移到50ml管中，另补加3ml SOC培养基， 37℃，200 rpm复苏60分钟。
6. 5000 rpm 离心一分钟收菌，重悬后取 100-200 μl 涂布到含相应抗生素的 S.O.C 平板上（因菌量较大， 若全部涂板请选用直径 15cm 培养皿 2-5 个）。将平板倒置放于 37℃培养箱过夜培养过夜。
注意事项 :
1. 加入DNA时体积不应大于感受态体积的1/10。
2. 电击感受态细胞加入电击杯应避免产生气泡，气泡会增加弧光放电风险。
3. 当DNA不纯或存在盐，乙醇，蛋白及缓冲液等污染时，转化效率急剧下降。
4. 电击杯里的离子可增加溶液的电导，增大在含有细胞和DNA的溶液中产生电流和弧光放电的风险。
5. 若转化大质粒或想获得较高转化效率，推荐使用高纯质粒提取试剂盒提取质粒。质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。
6. 对于连接产物转化，转化前乙醇沉淀DNA后用适量TE缓冲液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM EDTA)重悬产物，保证DNA浓度不超过100 ng/μl。过高浓度连接产物或过大体积连接产物会降低转化效率，增加弧光放电的风险。
7. 入质粒时应轻柔操作，吸取感受态细胞时避免用力过猛，以免剪切力过大损伤细胞膜，降低转化效率。转化高浓度的质粒或连接产物可相应减少终用于涂板的菌量。
8. 电击感受态细胞保存在-80℃以下，高于-80℃超期储存会导致转化效率会下降。
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