- ￥380 - 3800
- 百奥莱博
- BTN60205-TUJ
- 北京
- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
295
- 英文名：
Plasmid DNA column extraction kit
- 保质期：
一年
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件：
常温运输和保存，RNaseA需要-20℃
- 规格：
50次
试剂盒特点：
- 快速、步骤少，整个操作在30分钟左右完成。
- 不需要预平衡离心吸附柱。
- 通用洗柱液即开即用，不需要用户额外加乙醇。
- 溶液B中有蓝色染料，便于目测非常关键的碱变性和中和反应两步的溶液混匀状况，保证实验效果。
- 产量高，一次可以处理1～4mL过夜培养的菌液，每毫升过夜培养的细菌可以提取到2～5μg/mL（取决于质粒是高拷贝、中拷贝还是低拷贝）。
- 纯度高，采用本试剂盒提取的质粒OD比值在1.8～2.0之间，可以直接用于酶切、转化、测序及PCR等。
试剂盒组成：
| 组分 | 规格 |
| 溶液A | 26mL |
| 溶液B | 26mL |
| 溶液C | 36mL |
| RNase A溶液,10mg/mL | 0.6mL |
| 通用洗柱液 | 50mL×2 |
| DNA洗脱液2.0 | 10mL |
| 离心吸附柱 | 50套×2 |
运输及保存：
常温运输和保存，RNase A溶液需要-20℃保存，有效期一年。
使用方法：
- 从筛选平板上挑取单菌落至含抗生素的培养基中，37℃震荡培养12～16小时（摇床转速200-300）。注意：建议使用LB培养基，营养更丰富的培养基会使菌体浓度过高，超过纯化系统处理能力而降低DNA质量。另外，延长培养时间会因细胞死亡、裂解而造成质粒DNA浓度降低。
- 用1.5mL离心管收集1～4mL过夜培养饱和菌液，室温12000rpm离心1分钟，弃上清，再短暂离心，吸弃残留液体。
- 第一次使用本试剂盒时，先将全部RNase A溶液全部加入到溶液A中，摇匀后再取用，未用完的溶液A放4℃保存。
- 加入250μL溶液A，用枪头充分吹打使菌体重悬。注意：细胞未充分悬浮会影响后续碱变性，可以使用漩涡振荡器混匀或使用枪头吸头吹打沉淀至完全混匀。
- 加入250μL溶液B（如果溶液B在低温放置产生沉淀，须37℃加热溶解后冷却到室温方可使用），温和反复颠倒混匀看到溶液的蓝色变得均匀并且溶液变粘即可（一般需要颠倒4～6次），然后冰上放置不超过5分钟。注意：冰上放置不要超过5分钟，否则质粒DNA会有碱损伤。千万不要剧烈振荡，否则基因组DNA断裂产生的片段非常容易污染质粒DNA。
溶液B用后需要将盖拧紧存放，否则空气中的二氧化碳会进入溶液，形成碳酸，中和溶液B中的碱，降低其效率。如果溶液B颜色不是蓝色，则表示变质，应该弃之不用并且速跟厂家联系。 - 加入350μL冰上预冷的溶液C，温和反复颠倒直到溶液颜色变成无色（一般需要颠倒混匀4～6次）。混匀后可见白色沉淀物产生，然后冰上放置至少5分钟让质粒DNA复性。
- 12000rpm离心3分钟，小心将上清液转移到离心吸附柱中。由于此时的溶液比重较大，部分沉淀物悬浮在上清液中属正常，吸取上清时避开漂浮的沉淀物即可。如果此步的离心在4℃进行，可减轻沉淀物漂浮。
- 静置2分钟以让质粒DNA与离心吸附柱充分结合，保证静置不少于2分钟十分重要。
- 室温12000rpm离心1分钟，弃收集管中的废液。
- 加入500μL的通用洗柱液到离心吸附柱中，室温12000rpm离心1分钟，弃收集管中废液。注意：通用洗柱液中含乙醇，每次用后需要将盖拧紧存放，否则乙醇会挥发。
- 重复上步1次。
- 室温12000rpm离心1分钟，甩干残留液体。此步不能省略，否则残留乙醇会影响DNA的后续使用（如残留乙醇使DNA溶液在电泳上样时不能沉淀到加样孔中）。
- 将离心吸附柱置于一个新的1.5mL塑料离心管（自备）中，加入30～100μL 65～80℃预热的DNA洗脱液2.0，室温放置2分钟。常温的DNA洗脱液2.0也可以用于洗脱，但产量稍微有所降低。
- 室温12000rpm离心1分钟，离心管底溶液即质粒DNA。
- 由于我公司的吸附柱结合DNA能力较强，如果再加适量DNA洗脱液2.0到离心吸附柱中，往往还能洗脱下很多质粒DNA（相当于第一次洗脱的20～30%），但注意不要使用上步得到的DNA洗脱液2.0来洗脱。
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文献和实验质粒DNA十100µl感受态细胞悬液。(2) 将以上各样品轻轻摇匀，冰上放置20-30min，于42℃水浴中保温1－2min，然后迅速冰上冷却2min(3) 立即向上述管中分别加入0.4ml LB液体培养基（不需在冰上操作），使总体积到0.5ml，该溶液称为转化反应原液，摇匀后于37℃振荡培养约45-60min ，使受体菌恢复正常生长状态，并使转化体表达抗生素基因产物(Ampr)。3) 平板培养（有时需要稀释） (1) 取各样品培养液0.1ml，分别接种于含抗菌素LB平板培养基上，涂匀
【基本原理】此试剂盒用于质粒DNA小量纯化。该试剂盒采用了传统的SDS碱裂解法，结合DNA制备膜技术，具有高效、快速、方便之特点，全套操作只需1小时便可完成。使用本试剂盒可从1-4ml 的过夜培养的菌液中纯化得到1～20μg的高纯度质粒DNA，此质粒DNA可直接用于DNA序列分析以及各种酶促反应等。【器材】1．离心机2. Spin Column3. Collection Tube (2ml)*1初次使用试剂盒时，请将RNase A1全部加入到SolutionI中，混合均匀后4℃保存。*2若出现
，即切胶的那次电泳中，如果切成的条带很清晰，不拖泥带水，没有弥散，没有拖尾，那做回收、连接效果最好。相反，若有弥散、拖尾、不清楚、一团亮等情况就是切的不好，做后续实验成功率会降低。若真是效果很差建议改进体系重新切。 回收 回收可以用柱式试剂盒或手工法。柱式回收试剂盒：此类试剂盒适合各种长度 DNA，对黏性末端基本没有破坏，回收效率也不错。手工醇沉淀法步骤如下，把切得的胶弄碎，用 Tris-HCl 浸泡一段时间，吸出所有的液体，用酚抽提一遍，氯仿抽提一遍，加盐和醇醇沉，沉淀
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