Rosetta-gami 2(DE3) 感受态细胞100ul

同一批感受态细胞，用含目的片段的T载体质粒转化（阳性对照）能长出密密麻麻的菌落，而用另一种载体和目的片段的连接产物转化，却一个菌都没长出来，重复了三次都这样。请问这是感受态细胞的制作不过关，还是连接出了问题？哪个可能性大些？
答：应该是连接的问题。所有连接反应建议同时转化酶切后的质粒作为另一个阴性对照，确定酶切是否完全。同时连接前请确定质粒和片段浓度达到最小连接量的要求。
产品描述：

产品名称	包装	分类
Rosetta-gami 2(DE3) 感受态细胞100ul*50	100ul*50	表达感受态细胞

Rosetta-gami 2(DE3) 感受态细胞100ul*50注意事项：
1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。 
2. 混入质粒或连接产物时应轻柔操作。 
3. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。
IP6K1 Others Human 人 IHPK1 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 颜料绿 7Pigment Green 7质量规格：
原代骨骼肌细胞特制无血清添加剂Many types of cells包装：1ml酞菁(II)(>95.0%(T))Lead(II) Phthalocyanine质量规格：>95.0%(T)
MN-h, 小鼠海马神经元 人肝上皮细胞，THLE-3细胞 EL4(淋巴瘤细胞)酞菁锌(>95.0%(T))Zinc Phthalocyanine质量规格：>95.0%(T)
人结直肠腺癌细胞;HT-29酞菁铁(II)(>95.0%(T))Iron(II) Phthalocyanine质量规格：>95.0%(T)
TGFBR1 Others Human 人 TGFBR1 / ALK-5 / SKR4 人细胞裂解液 (阳性对照) 酞菁二钠Disodium Phthalocyanine质量规格：
BACE2 Others Mouse 小鼠 BACE2 / Beta secretase 2 人细胞裂解液 (阳性对照) 苯硫(分析标准品,>99%(GC）)Diphenyl sulfide质量规格：分析标准品,>99%(GC）
人主动脉平滑肌细胞完全培养基 100mL4,4'-二氨基二苯(ODA)(标准品)4,4′-Diaminodiphenyl ether质量规格：分析标准品
S-180细胞，小鼠肉瘤细胞 THP-1(单核细胞白血病) 人细胞;C-33A二十二烷(分析标准品,≥99.5%(GC))Docosane质量规格：分析标准品,≥99.5%(GC)
集落刺激因子4,4'-二氨基二苯硫(标准品)4,4'-Thiodianiline质量规格：分析标准品
SW579(人甲状腺鳞癌细胞 ) 5×106cells/瓶×2 甲型流感 H1N1 (A/USSR/90/1977) 神经氨酸酶 (Neuraminidase / NA) 人细胞裂解液 (阳性对照) 丙位十二内酯(分析标准品,≥98.5%(GC)) γ-Dodecalactone质量规格：分析标准品,≥98.5%(GC)
普鲁卡因（标准品）  Chloroprocaine hydrochloride  质量规格：含量测定 小鼠神经丝蛋白(NF)ELISA试剂盒 ，英文名： NF ELISA Kit
盐酸乙哌立松（标准品）  Eperisone hydrochloride  质量规格：含量测定 小鼠神经丝蛋白L(NF-L)ELISA试剂盒 ，英文名： NF-L ELISA Kit
孕三烯酮（标准品）  Gestrinone  质量规格：含量测定 小鼠神经肽Y(NPY)ELISA试剂盒 ，英文名： NPY ELISA Kit
西尼地平(标准品)  Cilnidipine  质量规格：HPLC>97%,标准品 小鼠神经肽Y(NP-Y)ELISA试剂盒 ，英文名： NP-Y ELISA Kit
西尼地平  Cilnidipine  质量规格：>97%,BR,可用于细胞培养 小鼠神经特异性烯醇化酶(NSE)ELISA检测试剂盒MouseNeuron-specificenolase,NSEELISAKit 96T/48T
托品醇（盐酸托烷司琼杂质）（标准品）  Tropine  质量规格：供检查用 小鼠神经特异性烯醇化酶(NSE)ELISA试剂盒 ，英文名： NSE ELISA Kit
辅酶Q9  CoenzymeQ9  质量规格：>99% 小鼠神经调节蛋白1(G1)ELISA试剂盒 ，英文名： G1 ELISA Kit
辅酶Q9(标准品)  CoenzymeQ9  质量规格：>99%,标准品 小鼠神经调节蛋白2(G2)ELISA试剂盒 ，英文名： G2 ELISA Kit
利可君（标准品）  Leucoson  质量规格：含量测定 小鼠神经调节蛋白3(G3)ELISA试剂盒 ，英文名： G3 ELISA Kit
拉米夫定（标准品）  Lamivudine  质量规格：含量测定 小鼠神经调节蛋白4(G4)ELISA试剂盒 ，英文名： G4 ELISA Kit
Rosetta-gami 2(DE3) 感受态细胞100ul*50小鼠神经生长因子(NGF)ELISA检测试剂盒MouseNervegrowthfactor,NGF 96T/48T 盐酸番茄碱（标准品）  Tomatidine hydrochloride  质量规格：HPLC≥98%,标准品
小鼠神经生长因子(NGF)ELISA试剂盒 ，英文名： NGF ELISA Kit 盐酸头孢唑兰  Cefozopran hydrochloride  质量规格：>97%,BR
小鼠神经生长因子前体(proNGF)ELISA试剂盒 ，英文名： proNGF ELISA Kit 阿嗪米特（标准品）  Azintamide  质量规格：含量测定
小鼠神经丝蛋白(NF)ELISA试剂盒 ，英文名： NF ELISA Kit 普鲁卡因（标准品）  Chloroprocaine hydrochloride  质量规格：含量测定
小鼠神经丝蛋白L(NF-L)ELISA试剂盒 ，英文名： NF-L ELISA Kit 盐酸乙哌立松（标准品）  Eperisone hydrochloride  质量规格：含量测定
小鼠神经肽Y(NPY)ELISA试剂盒 ，英文名： NPY ELISA Kit 孕三烯酮（标准品）  Gestrinone  质量规格：含量测定
小鼠神经肽Y(NP-Y)ELISA试剂盒 ，英文名： NP-Y ELISA Kit 西尼地平(标准品)  Cilnidipine  质量规格：HPLC>97%,标准品
小鼠神经特异性烯醇化酶(NSE)ELISA检测试剂盒MouseNeuron-specificenolase,NSE 96T/48T 西尼地平  Cilnidipine  质量规格：>97%,BR,可用于细胞培养
小鼠神经特异性烯醇化酶(NSE)ELISA试剂盒 ，英文名： NSE ELISA Kit 托品醇（盐酸托烷司琼杂质）（标准品）  Tropine  质量规格：供检查用
小鼠神经调节蛋白1(G1)ELISA试剂盒 ，英文名： G1 ELISA Kit 辅酶Q9  CoenzymeQ9  质量规格：>99%
Rosetta-gami 2(DE3) 感受态细胞100ul*50操作方法：
1. DH5α感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰中并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。
4. 5000 rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少15小时。
感受态细胞放到-80冰箱了有半年了，还能用来转化质粒吗？
答：如-80冰箱储存过程中没有发生冻融的情况，是可以用来转化的，但是由于冻存时间过长，转化效率会有所下降，如果用于普通的质粒重转或TA克隆等高效连接体系也是可以的，如珍贵的样品请选用较为新鲜的感受态细胞。