镁离子荧光探针(Mag-Fura-2 AM)(130100-

特别提示：包括镁离子荧光探针(Mag-Fura-2 AM)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：镁离子荧光探针(Mag-Fura-2 AM)
英文名称：5-Oxazolecarboxylic acid, 2-[5-[2-[(acetyloxy)methoxy]-2-oxoethoxy]-6-[bis[2-[(acetyloxy)methoxy] -2-oxoethyl]amino]-2-benzofuranyl]-(acetyloxy)methyl ester
产品货号：KM0004
产品规格：10×50μg

Mag-Fura-2 AM是一种胞内镁离子指示剂，属于紫外激发的比率型探针，与镁离子结合的Kd值为1.9mM。与Fura-2类似，Mag-Fura-2的激发波长历经蓝色迁移从369nm到330nm。Mag-Fura-2 AM具细胞膜渗透性，只需简单孵育，即可加载进入细胞。

CAS号：130100-20-8
分子式：C30H30N2O19
分子量：722.56g/mol
外观：黄色固体
纯度：≥90%
Ex/Em：336/503 nm
溶解性：溶于DMSO
保存：-20℃干燥避光保存，至少一年有效。

储存液制备
取一管低温保存的Mag-Fura-2四钾盐,，置于室温回温至少20min。之后加入适量蒸馏水或水溶性缓冲液配制成相应浓度的储存液。未使用的储存液分装储存在-20℃，且避光保存。至少能稳定保存6个月。

使用方法：

一、储存液制备
取一管低温保存的Mag-Fura-2 AM,，置于室温回温至少20min。之后加入高质量无水DMSO配制成1~5mM储存液，比如50μgMag-Fura-2 AM（Mw：722.56 g/mol）溶于13.8μlDMSO，充分溶解后，即得到5mM储存液。
注意：未使用的储存液分装储存在-20℃，避免反复冻融，且要避光保存。尽快使用完。

二、操作步骤
注意：以下使用方法仅作参考，需根据具体的细胞类型和实验要求做出调整。加载温度范围是RT~37℃，更高温度会提高加载速度，但更低温度能最小化染料的内在化现象。表面活性剂Pluronic F-127有时加入能促进AM探针在水溶性缓冲液内的均匀分散。
1．在所需温度（25℃~37℃）预孵育细胞10min，使其离子梯度达到稳定和平衡。
2．取4μl Mag-Fura-2 AM储存液和5μl 20%Pluronic?F-127，加入1ml细胞培养液，剧烈漩涡混匀得到均匀的探针分散液。
3．取250μl上述制备的探针分散液加入750μl含细胞的培养基内，混匀，此时得到终浓度为1~5μM的工作液，根据起始母液浓度来确定。
4．根据需求探针孵育15~60min。
5．细胞清洗3次，之后继续孵育30min以保证细胞内的探针完全去酯化。之后选择合适的仪器，进行荧光测定。

三、响应校正
镁离子指示剂的校正方法基本与钙离子指示剂类似。需注意校正是在所有指示剂都已去酯化且都与离子结合的假设上进行。校正包括完全不含离子和离子完全饱和相对于外部控制镁离子浓度的荧光测定。胞内校正可能以两种方式进行，要么通过去污剂裂解细胞（通常使用地高xīn）将胞内指示剂释放进入周围溶液，要么通过一种离子载体来控制胞内镁离子，不用释放指示剂到周围溶液。比率型指示剂比如Mag-Fura-2也可能在无细胞溶液内进行校正，虽然偏好选择原位校正，由于指示剂对镁离子的亲和性依赖于胞浆环境。相对于离子霉素（KM0191-1MG），镁离子校正时倾向选择离子载体A-23187（KM0193-1MG）和4-bromo-A23187（KM0194-1MG），由于前者能更有效的转运镁离子。用来校正镁离子指示剂的溶液最初需不含重金属离子比如镁，否则会与镁离子指示剂结合。可通过二价阳离子螯合剂TPEN（KM0037-25MG）处理溶液。

1．对于具离子依赖性的光谱迁移的指示剂，比如Mag-Fura-2，Kd值（或Mg2+浓度，当Kd值已知）能通过以下公式进行换算：

R：代表荧光比值（Fλ1/Fλ2），λ1是离子复合物的检测波长，λ2是游离指示剂的检测波长。Min和Max表示最小和最大离子浓度。Q：λ2波长检测下的Fmin/Fmax的比值。Kd是离子-指示剂复合物的解离常数。

2．对于单波长指示剂比如Mag-Fluo-4，通过以下公式来确定Kd值，F指的是在单波长下测定的荧光强度。

在上述公式中，需注意F值依赖于指示剂浓度，但R值不依赖于指示剂浓度。

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