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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
398
- 保质期:
一年
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
2-8℃
- 规格:
50ml|100ml
特别提示:包括非变性蛋白裂解抽提液在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:非变性蛋白裂解抽提液
产品货号:HR0261
产品规格:50ml|100ml
非变性蛋白裂解液是一种在非变性条件下裂解细胞和组织的裂解液。能裂解细胞并充分释放胞浆蛋白和可溶性膜蛋白、核蛋白。裂解蛋白产物最大限度地保留了蛋白的特性和功能。本裂解液裂解的细胞和组织样本,主要用于Western,免疫沉淀和免疫共沉淀等。
裂解液中已含常用蛋白酶抑制剂,AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin和磷酸酶抑制剂。
储存条件:2-8℃保存。
有效期:一年。
注意事项:
● 实验过程中的所有试剂须预冷;所有器具须放-20℃冰箱预冷。
● 整个过程须保持样品处于低温状态。
●本试剂盒仅供科学研究使用,不可用于诊断或治疗。
● 禁止与其他品牌的试剂混用,否则会影响使用效果。
● 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿,可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
● 避免皮肤或粘膜与试剂接触。
使用方法:
A.细胞裂解
1.取5-10×106个细胞,在4℃,1000rpm条件下离心5-10分钟,小心吸取培养基,尽可能吸干,收集细胞。
2.用冷 PBS洗涤细胞两次,每次洗涤后尽可能吸干上清。
3.每 5×106个细胞中加入500μl冷的裂解液(每106个细胞加100μl裂解液。大约相当于6孔板的每孔加入100μl~150μl,或一个75 cm2培养瓶加1~2ml。
裂解液和细胞应充分接触。如果裂解液不足量,细胞裂解效率将会降低),混匀后,在4℃条件下振荡15-20分钟。
4.在 4℃,14000rpm条件下离心15分钟。
5.快速将上清吸入另一预冷的干净离心管,用于下游实验。
B.组织裂解
1.取100mg组织样本剪碎,加入1ml裂解液,用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体。
2.将组织匀浆吸入另一预冷的干净离心管中,在4℃,10000rpm条件下离心5分钟。
3.将上清吸入另一预冷的干净离心管,用于下游实验。
上述蛋白提取物可分装后于-80℃冰箱保存备用。
我公司销售的非变性蛋白裂解抽提液报价,质量上佳,价格普惠,欢迎广大新老客户踊跃订购。
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文献和实验物和游离的探针分离开?将结合蛋白或粗制核抽提液和目的探针结合,蛋白/探针复合物和游离探针可在非变性聚丙烯酰胺凝胶中经电泳分离。聚丙烯酰胺的浓度一般为6%,在特定条件下可用高或低的浓度。也可将TGE缓冲液(12.5mM Tris,pH8.3,95mM 甘氨酸,0.5mM EDTA)用于不稳定的蛋白/DNA复合物。在4℃进行结合和电泳实验以阻止不稳定复合物和探针的解离。当带型不紧密出现拖尾时,表明复合物存在解离。凝胶必需完全聚合,以避免带型拖尾。如复合物不进入凝胶则表明所用的蛋白或探针过量,或盐的浓度
。特异与非特异性竞争DNA的用量也需优化或滴定,但竞争DNA通常是标记的探针用量的30-100倍(w/w)。 5、用什么凝胶条件将蛋白质/探针复合物和游离的探针分离开? 将结合蛋白或粗制核抽提液和目的探针结合,蛋白/探针复合物和游离探针可在非变性聚丙烯酰胺凝胶中经电泳分离。聚丙烯酰胺的浓度一般为6%,在特定条件下可用高或低的浓度。也可将TGE缓冲液(12.5mM Tris,pH8.3,95mM 甘氨酸,0.5mM EDTA)用于不稳定的蛋白/DNA复合物。在4℃进行结合和电泳实验以阻止不稳
P同位素标记的DNA或RNA探针一同保温,在非变性的聚丙烯凝胶电泳 上,分离复合物和非结合的探针。DNA-复合物或RNA-复合物比非结合的探针移动得慢。同位素标记的探针依研究的结合蛋白的不同,可是双链或者是单链。当检测 如转录调控因子一类的DNA结合蛋白,可用纯化蛋白,部分纯化蛋白,或核细胞抽提液。在检测RNA结合蛋白时,依据目的RNA结合蛋白的位置,可用纯化或部分纯化的蛋白,也可用核或胞质细胞抽提液。竞争实验中采用含蛋白结合序列的DNA或RNA片段和寡核苷酸片段(特异), 和其它非相关的片段(非特异),来确定
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