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999
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北京拜尔迪生物技术有限公司
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0
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500ml
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文献和实验化,可利用此种性质的变化测定各种蛋白质的等电 点。最常用的方法是测其溶解度最低时的溶液pH 值。 本实验借观察在不同pH 溶液中的溶解度以测定酪蛋白的等电点。用醋 酸与醋酸钠(醋酸钠混合在酪蛋白溶液中)配制成各种不同pH 值的缓冲液。 向诸缓冲溶液中加入酪蛋白后,沉淀出现最多的缓冲液的pH 值即为酪蛋白 的等电点。 3、器材 (1)水浴锅(2)温度计(3)200mL 锥形瓶 (4)100mL 容量瓶(5)吸管(6)试管 (7)试管架(8)乳钵 4、试剂
。 b.若上步骤中中间层较厚,则继续加入等体积24:1,再次抽提一次,直至中间层较薄。 6. 在抽提出的水相中加入1/3体积的5M的KAc及等体积的异丙醇(4℃预冷),轻轻晃动混合均匀后在-20℃沉淀。沉淀至少15分钟至过夜。 6-1 在抽提出的水相中加入1/10体积醋酸钠(pH5.2, 3M),混匀后,加入2倍体积预冷的无水乙醇,-20℃沉淀15min至过夜。 6-3. 在抽提出的水相中加入加入2倍体积预冷的无水乙醇,-20℃沉淀15分钟至过夜
液:0.2M Tris-HCl(pH 7.5),0.5M NaCl,0.01M EDTA,1%SDS, 3M NaAc 方法二: 1. 真菌菌丝 0.5-1 g, 在液氮中迅速研磨成粉 2. 加入 3 mL 65℃ 预热的 DNA 提取缓冲液,快速振荡混匀 65℃ 水浴 30 min, 期间混匀 2-3 次 3.加入 1 mL 5M KAc,冰浴 20 min 4.等体积的氯仿: 异戊醇 (24:1) 抽提 1 次(10,000 rpm
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