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- 2025年07月16日
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文献和实验RNA 构建cDNA文库要求的RNA量比做RACE和Northern blot的要多，在材料允许的情况下一般的试剂盒均推荐采用纯化总mRNA后进行反转录，这比直接采用总RNA进行反转录而构建的cDNA文库好，虽然后者也并不是不能做。老版本CLONTECH的SMART 4的中级柱子要求纯化后的总mRNA量最好在0.05-0.5微克左右，这就要求起始总RNA量较多。虽然有的试剂盒声称少至几十个纳克的总RNA也可以构建cDNA文库，但这是针对材料极为稀缺者而言，但起始RNA太少还是会或多或少影响文库构建
CloneMiner™ cDNA文库构建试剂盒(CloneMiner™ cDNA Library Construction Kit)使你能够得到具有高度代表性cDNA 文库，而不需要用限制性内切酶来切断你宝贵的基因。现在你能从高质量的cDNA文库中分离完整的全长基因。 克服文库构建的缺陷 传统的cDNA文库构建途径有许多与生俱来的缺陷：1)cDNA合成不佳，2)连接效率低，3) 在限制
input量少；可结合Quantseq 3’mRNA建库试剂盒使用，节省大量的测序空间，大大节约测序成本，使其成为RNA代谢动力学研究的首选，同时，SLAM-seq技术方法学发表在了Nature Methods上。 图3 SLAMseq工作流示意图。培养的细胞用4-硫代尿苷(S4U)标记新生RNA(绿色)。抽提纯化总RNA，并加入碘乙酰胺(IAA)诱导4-巯基烷基化。用QuantSeq 3’ mRNA-Seq文库构建试剂盒进行文库构建，在反转录过程中，S4U位点会反转录成鸟嘌呤 (G，红色
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