cDNA文库构建试剂盒

cDNA文库构建

RNA 构建cDNA文库要求的RNA量比做RACE和Northern blot的要多，在材料允许的情况下一般的试剂盒均推荐采用纯化总mRNA后进行反转录，这比直接采用总RNA进行反转录而构建的cDNA文库好，虽然后者也并不是不能做。老版本CLONTECH的SMART 4的中级柱子要求纯化后的总mRNA量最好在0.05-0.5微克左右，这就要求起始总RNA量较多。虽然有的试剂盒声称少至几十个纳克的总RNA也可以构建cDNA文库，但这是针对材料极为稀缺者而言，但起始RNA太少还是会或多或少影响文库构建

各家cDNA文库构建试剂盒优缺点比较

2特别适合研究一个基因在不同表达系统中的表达,对于后续的工作有利。 缺点: 1无论是Gateway还是Topo，封闭的系统仅适用于Invitrogen提供的表达载体，使得适用成本高。而且在启动子和目的基因间必需插入一段特定的噬菌体重组酶识别序列，对表达的影响不好估计。 2所得的并非都是全长cDNA 有不对之处忘大家指正 Clontech的: 采用的是SMART与Infusion技术：合成引物时两端对应

cDNA文库构建方法

by annealing the mRNA to oligo-dT loaded magnetic beads which will greatly facilitate the subsequent recovery of the cDNA products. In either case the next step is a reverse transcriptase treatment which gives rise to a socalled DNA/RNA hybrid. 5. Oligo dG