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文献和实验,或者可以表达以产生重组蛋白。pET-32α(+)载体系列用于表达与109 aa Trx•Tag™硫氧还蛋白融合的肽序列。它属于一种表达系统,可在其激活后产生所需的蛋白质。插入原核宿主细胞。原核细胞如大肠杆菌因为它们廉价,快速的生物量积累和简单的工艺规模扩大,因此是外源蛋白表达的首选宿主。在本文中,我们将重点总结这种在我们的实验室中使用的有用技术。表达后pET-32α(+)载体的构建,蛋白质表达和蛋白质纯化将在本文中详细描述。获得用于构建载体的外源DNA片段插入载体的DNA通常可以使用聚合酶链式反应(PCR
注意事项: 使用TrueGel3D™水凝胶快速构建试剂盒时,可以修改和优化不同参数。表1提供了使用或不使用TrueGel3D™ RGD整合素粘附肽或蛋白制备软水凝胶的试剂体积。 试剂 试剂体积(µL) 无TrueGel3D™ RGD整合素粘附肽 有TrueGel3D™ RGD整合素粘附肽 有蛋白质(推荐浓度:200 µg/ml) 巯基反应性聚合物(FAST-PVA或FAST-DEXTRAN)
下厌氧培养 24 h。3. DNA 模板制备及浓度测定 取1.4 ml TPGY 培养物转移到 1.5 ml 离心管中,14000 r/min 离心 2 min,弃去上清液。沉淀使用商品化细菌基因组 DNA 提取试剂盒提取 DNA,按照试剂盒说明书进行操作。提取的 DNA 进行纯度和浓度测定后置于 -20 ℃ 保存。4. PCR 扩增 采用分别针对 A、B、E、F 型肉毒梭菌肉毒毒素基因设计的型特异性引物(见附表1),进行多个 PCR 扩增,每个 PCR 反应管检测一种类型的肉毒
技术资料暂无技术资料 索取技术资料







